实验三琼脂免疫电泳实验.pptVIP

实验三琼脂免疫电泳实验掌握免疫电泳实验结果的分析方法，并对粗提的蛋白进行检测。03掌握免疫电泳的操作过程和方法。02了解免疫电泳的原理和用途。01实验目的免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。01先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血清。0237℃下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解03见图。04实验原理免疫电泳原理图解1牛血清3琼脂糖2粗提蛋白4巴比妥缓冲液（PH8.6，离子强度0.05）5兔抗牛血清实验材料：操作步骤（1）配制1.2％的琼脂，加热使之融化。（巴比妥缓冲液配制）（2）吸取3－－4mL琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，注意要马上用吸管尖把琼脂表面整平，若有气泡立刻除去，并立即于中间横放一根毛细管，待凝，制成2mm的琼脂板。（3）取打孔器在图示的位置打孔（图），此二孔位置要对称。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。2mm2mm图2胶板打孔及挖槽示意图（4）用微量加样器加入10－－20uL的粗提蛋白和牛血清，不要溢出（可加入指示剂）。（5）把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压10-12v/cm电泳1-2h。（6）样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终止电泳，小心取出载玻片。（7）用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要深及底部，两道平行线间隔不可大于3mm。用大头针挑去琼脂。（8）加入人全血清，放入湿盒中，37℃下扩散24h。