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肌糖原的酵解

——实验研讨;;实验内容——肌肉糜的糖酵解;

（3）取出试管，立即向1、2号试管内加入15%偏磷酸液3mL并混匀。将各试管内容物分别过滤，弃去沉淀。

（4）量取每个样品的滤液4mL,分别加入已编号的试管中，然后每管内加入饱和的硫酸铜液1mL，混匀，再加入0.4g氢氧化钙粉末，用玻璃棒充分搅匀，放置30min，并不时搅动内容物，使糖沉淀完全。将每个样品分别过滤，弃去沉淀。;实验内容——乳酸的测定;结果和分析;课后研讨题;

3.在乳酸测定过程中，为什么先要进行冰浴并随时冷却？

浓硫酸接触有水的试剂后会放出大量热，冰浴可以吸收浓硫酸放出的热量。

4.在本实验中，怎样做才可以尽可能减小实验误差得出理想结果？

实验过程中蛋白质和糖对实验的影响很大，在实验前要把实验所用的试管洗干净，在实验糖酵解过程中要在无氧条件下进行。;

5.阐述分析糖酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义

理情况下，大多数组织有足够的氧以供有氧氧化之需，很少进行糖酵解，因此这一代谢途径供能意义不大，但少数组织，如视网膜、睾丸、肾髓质和红细胞等组织细胞，即使在有氧条件下，仍需从糖酵解获得能量。在某些情况下，糖酵解有特殊的生理意义。例如剧烈运动时，能量需求增加，糖分解加速，此时即使呼吸和循环加快以增加氧的供应量，仍不能满足体内糖完全氧化所需要的能量，这时肌肉处于相对缺氧状态，必须通过糖酵解过程，以补充所需的能量。在剧烈运动后，可见血中乳酸浓度成倍地升高，这是糖酵解加强的结果。又如人们从平原地区进入高原的初期，由于缺氧，组织细胞也往往通过增强糖酵解获得能量。在某些病理情况下，如严重贫血、大量失血、呼吸障碍、肿瘤组织等，组织细胞也需通过糖酵解来获取能量。倘若糖酵解过度，可因乳酸产生过多，而导致酸中毒。;5.总结本实验操作的关键环节和注意事项。

实验成功的两个关键步骤：

（1）向空白管加入30%三氯乙酸。30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活，这一步一定要保证肌肉糜完全失去活性，以增强最终显色的比色效果，判定肌肉糜失活的标识是肌肉糜呈惨白色，无血色。

（2）加入饱和CuSO4和Ca(OH)2粉末。加入饱和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是去除反应体系中的糖和蛋白质，对羟基联苯反应非常敏感，若体系中含有糖和蛋白质，可能会对以后的颜色鉴别产生影响，因此这步非常关键。;注意事项：

（1）30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活(即肌肉糜中的蛋白失活)，因此在用30%三氯乙酸处理空白管中的肌肉糜时，一定要充分，直至肌肉变为惨白色为止，在处理过程中，可使用玻璃棒不断搅捻肌肉糜，使其充分接触三氯乙酸，以使肌肉糜完全失活。

（2）加液体石蜡目的是隔绝空气，给反应体系创造无氧环境，加入的石蜡不用太多，刚好把口封住最佳。

（3）37度保温时间1-1.5h，可通过前期的预实验确定最佳保温时间。;（4）在加入饱和CuSO4之前需将肌肉糜挑出。

（5）加入饱和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是去除反应体系中的糖和蛋白质，加入饱和CuSO4和Ca(OH)2粉末如一定要充分震荡10min，使CuSO4、Ca(OH)2和反应体系充分接触，完全去除多余的糖和蛋白质。

（6）乳糖的测定中，在加入样品滤液和对羟基联苯时，一定不要加到壁上，否则会对结果造成干扰。;心得与体会;5.实验中加入饱和硫酸铜溶液的目的是为了除去糖，加氢氧化钙的目的是为了让蛋白质变质，原因是糖类和蛋白质会影响最乳酸的显色反应，此步骤也是实验的关键，加入这两样东西后，一定要充分振荡，除去糖类和蛋白质的影响。

6.用于检验乳酸产物的四只试管必须是干燥洁净的，否则可能会混入糖类或蛋白质对最后结果产生影响

7.乳糖的测定中，在加入样品滤液和对羟基联苯时，一定不要加到壁上，否则会对结果造成干扰。

8.注意一些金属离子、PH、温度等对组织中酶类的影响作用，要尽量排除组织中未知物质的干扰作用以及空气中氧气、二氧化碳及环境中其他因素的影响。

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