放射免疫分析RIA.ppt

定义：全称体外放射配体结合分析---指在体外条件下，以放射性核素标记的配体为示踪剂，以结合反应为基础，以放射性测量为定量手段，对微量活性物质进行定量分析的一类检测技术的总称。

配体---能与结构上某一部位起互补结合的分子或化合物，如抗体、抗原，受体、蛋白激素

;抗原的概念;基本定义;主要内容;1.历史回顾

1959年Berson、Yalow开创了放射免疫分析。于1977年荣获诺贝尔生物医学奖。

1960年Ekins建立了竞争蛋白结合分析法。

1968年Miles和Hales建立了免疫放射分析。

近年来化学发光、电子化学发光、荧光时间分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。;2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类）

放射免疫分析（RIA）1959

竞争性蛋白结合分析（CPBA）1963

免疫放射分析（IRMA）1968

放射受体分析（RRA）70年代

放射酶学分析70年代

放射微生物分析;其他非放射性标记免疫分析：

酶免疫分析（EIA）

化学发光免疫分析（CLIA）

荧光免疫分析（FIA）

时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）

颗粒计数免疫分析（PACIA）

……

;主要内容;放射免疫分析（RIA)

（RadioimmunoassayRIA）;基本试剂

基本原理

操作过程

分离技术

质量控制;RIA定义;RIA基本试剂;125I的特性：

碘元素共有29种同位素，其中23种放射性核素，125I最为常用，优点：

半衰期适中（60天），易于商品化和储存，也利于废物处理；

只发射28keVχ线和35keVγ射线（无β），容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定；

化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记物而广泛应用。

;2、标准抗原（标准品）

是已知含量并呈梯度浓度的系列标准抗原，作标准曲线用。

要求：

保证与被测物具有相同的免疫活性和相同介质。;3、抗体

RIA使用：多克隆抗体

单克隆抗体;;RIA基本原理;Ag*AgAbBoundFreeBFB/F;05101520;RIA操作过程;样品或标准品

标记物

抗血清;RIA分离技术;聚乙二醇;活性炭吸附法;固相法;部分游离抗原未被洗净---沉淀法和固相法

分离剂质量差或量不足

;RIA质量控制;系统误差表现为结果呈倾向性偏高或偏低。常见因素①方法误差：如标准品稀释不正确，分离效果不好等②仪器和试剂：仪器状态、量器、试剂纯度等③操作误差：操作习惯、加错样品等。通过努力系统误差可以消除。

随机误差表现为某一管或某一部分样本的结果误差随机的、偶然的，小误差的概率大。常由操作者操作不当造成。;质量控制的指标;1、稳定性：指RIA实验批间的重复性。;标准曲线直线回归的参数

截矩a---稳定

斜率b---稳定

相关系数r99%

ED25、ED50、ED75

即标准曲线在25%、50%、75%时横坐标上对应的抗原浓度值。反映标准曲线的稳定性。;2、精密度：

是对某一样品多次检测所得结果的符合程度。即复管的重复性。是最重要的质量参数。

3、灵敏度：

方法的最小可测值。计算方法是累计多批（一般10次）测量结果，计算出零标准管的结合率为x－2SD时对应的剂量值。;4、准确度：是指测量值与真值的接近程度，评价方法：

?回收率：是反应测定值偏差的质控指标。对照管加入待测样品，回收管加入待测样品和已知量的标准品，两者实测结果相减即为外加标准品的实测含量。要求：接近100%，且变异小。

?质控样品：含有一种或几种测定物，其量值是经过标定的靶值，用来比较和评价测定系统的偏离和重复性的实验用血清。一般有高中低三种类型，衡量该批分析结果的准确度。

?健全性：用于评价标准品与待测样品的免疫活性是否一致。用样本稀释曲线与标准曲线的平行度来判断。;准确性和精密性如同打靶;RIA手工操作的质控难题;RIA的特点：

灵敏度高示踪高灵敏可达10-9～10-12g

特异性强免疫学反应，抗体为结合试剂特异结合的三维结合的位点

精确度好

方法的稳定性好

应用广泛;;真正使放免面临挑战的是20世纪90年代兴起的全自动化标记免疫分析的问世。

这种方法、仪器、试剂三位一体的特定分析系统有效地解决了大规模临床样本检测的稳定、高效、快速、自动化问题。是医学超微量分析的一次战略性革命。;一.??概述

二.??放射免疫分析（RIA）