2025年细菌芽孢染色.pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

细菌芽孢染色

摘要

本实验采用芽孢染色法分别对枯草芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌进行了染色。本实验

用的芽孢染色法的主要试剂是5%孔雀绿溶液，0.5%番红水溶液，并在加热条件

下使用孔雀绿以促进染料进入芽孢。实验最后分别观察到了两种菌染色后的芽

孢，但由于菌种培养时间较长，观察到的芽孢大多分散在菌体四周，很少有着生

在菌体上的。

关键词

芽孢（gemmaofafungus）芽孢染色法（Sporestaining）复染（counterstain）

实验目的

1.学习并掌握芽孢染色法

2.了解芽孢杆菌的形态特征

3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术

实验原理

芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的

休眠体结构，液被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。通常有端生和中生两种

着生位置，也可能发生膨大。本实验所选用的两种菌，枯草芽孢杆菌具有中生椭

圆形芽孢，梭状芽孢杆菌为中生膨大形芽孢。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，

着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体

相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这

一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿（malachitegreen）或碱性品

红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且

也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。

再用对比度大的复染剂（如番红液）染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为

原来的颜色，这样就可以将两者区别开来。

实验器材

菌种

枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌

人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

溶液和试剂

5%孔雀绿溶液，0.5%番红水溶液

仪器和其它用品

酒精灯，酒精，木夹，香柏油，二甲苯，载玻片，盖玻片显微镜，香柏油，擦镜

纸和接种针等

实验内容

涂片→干燥固定→染色（孔雀绿覆盖→冷却水洗→番红复染）→水洗干燥→镜检

1)涂片

先在载玻片上滴一滴蒸馏水，无菌操作用接种环由枯草芽孢杆菌（或梭状芽孢杆

菌）牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上挑取适量菌体在水中轻轻蘸几下。

2)干燥固定

按常规方法干燥固定。

3)孔雀绿覆盖

用木夹夹住载玻片一端，加数滴5%孔雀绿染液覆盖涂片，在微火上加热至染料

冒蒸汽并开始计时。维持5min。加热过程中及时补充染液。切勿让涂片上染液

干涸。

4)冷却水洗

待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止。

5)复染

用0.5%番红染液覆盖玻片，保持3min。

6)水洗干燥

用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止，使其自然干燥。

7)镜检

先低倍镜，再高倍镜，最后油镜观察。

实验结果

实验中，我制作的第一个玻片只能观察到大量绿色的芽孢，但是并未观察到清晰

的红色菌体。制作的第二个玻片虽能观察到红色菌体，但不太明显。最后观察了

同学制作比较成功的玻片并拍照记录。可以看到芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为

红色。枯草芽孢杆菌芽孢呈椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，菌体基本无大变

化；梭状芽孢杆菌芽