2025年常见的三种微生物染色方法.pdfVIP

操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰

常见的三种微生物染色方法

学院：生命科学专业：生物科学···2025级姓名：王亚军

摘要：在用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，

借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察细菌的形状及某些细胞的

结构。通过对细菌的简单染色可初步认识细菌的形态特征；通过革兰

氏染色可将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性;通过对细菌的芽孢染

色可初步了解芽孢杆菌的形态特征。通过这三种常见的微生物染色方

法，可对微生物的形态结构进行观察。

关键词：染料革兰氏染色无菌技术芽孢

引言：学会油镜的使用；学会对细菌进行涂片；学习无菌操作技术；

学会革兰氏染色法及芽孢染色法；了解芽孢杆菌的形态特征，观察押

宝的形态、大小、着生位置。

用于为生物染色的染料，是一类苯环上带有发色基团和助色基团

的有机化合物。发色基团赋予化合物颜色的特征，助色基团则给予化

合物能够成盐的性质仅含发色基团的苯化合物（称色原）即使带有颜

色也不能作为染料，因为它不能电离，不能与酸或碱形成盐，对微生

物没有结合力，很容易被洗脱或机械方法除去。染料通常都是盐，分

酸性染料和碱性染料两大类，但在微生物染色中，碱性染料较常用。

常用的碱性染料有美蓝、结晶紫、碱性复红、番红、孔雀绿等。

实验内容：

一、细菌的简单染色

1、原理：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，

臣心一片磁针石，不指南方不肯休。——文天祥

碱性染料在电离时，其分子染色部分带正电荷，因此碱性染料的

染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。故可用单一的碱性染料

对细菌进行染色。

2、器材：

（1）仪器：显微镜、酒精灯等

（2）实验材料：

菌种：枯草芽孢杆菌

四联球菌

染色剂：齐氏石碳酸复红染液

3、操作步骤：

（1）先将载玻片洗净，擦干。

（2）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴生理盐水，无

菌从斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀，涂成薄膜，越薄越好，注

意取菌不要太多。

（3）晾干：让涂片自然晾干。

(4)固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不

烫手为宜）。

(5)染色：滴加染液于涂片上，然也刚好覆

盖涂片薄膜即可。

百学须先立志。——朱熹

（6）水洗：倒去染液，用水冲洗，直到流下

的水为无色。

（7）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。

（8）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高

倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观

察细菌的形态。

结果：通过油镜可看到枯草芽孢杆菌呈杆状、线状排列。四联球菌常

四个球菌排成方形。

二、革兰氏染色法

1、原理

由于细菌细胞壁的结构和组成不同，革兰氏染色法将细菌分为革兰氏

阳性和革兰氏阴性。当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的

蓝紫色。典作为媒染剂，它能于结晶紫结合成结晶紫--典的复合物，

增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效

果是不同的。革兰氏阴性细菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的

类脂质，而且肽聚糖层较薄、交