实验-大肠杆菌的培养与分离.ppt

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。实验目的:1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线培养3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、基础知识：

(一)微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．(二)细菌1、结构2、分裂3、生殖4、变异类型5、在基因工程中的应用细菌的类型图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌大肠杆菌属于杆状菌根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。自养菌:异养菌:腐生菌寄生菌大部分病原菌细菌的营养类型光能自养型:光合细菌化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌细菌的革兰氏染色革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌-------培养基1.定义培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。(三)细菌的培养2.培养基的五大营养成分：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、氧气、渗透压的要求．不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方：细菌喜荤，霉菌喜素大肠杆菌的配方：酵母提取物???0.5g蛋白胨???0.5gNacl????????0.5g琼脂???????1g水50ml3.培养基的类型按物理状态分：固体培养基和液体培养基。成分区别：是否加琼脂按功能分：选择培养基和鉴别培养基按成分分：天然培养基和合成培养基液体培养基：扩增细菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞.使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.

加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。4、菌落液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长二、无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。（１）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：是指杀灭病原微生物的方法。是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽孢、孢子）的方法a.煮沸消毒法:100℃煮沸5-6minb.巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15minc.化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源；高锰酸钾溶液；次氯酸钠溶液等……（3）常用消毒的方法：a、灼烧灭菌常用灭菌的方法：b、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。c、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15min.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判