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天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
动物性病原微生物的实验室检测常规方法简述
第一篇：动物性病原微生物的实验室检测常规方法简述
动物病原微生物的常规实验室检测方法简述
随着我国动物养殖业的飞速发展，动物传染病逐渐呈现出非典型
性症状和混合感染的征状日趋严重，许多病例仅靠临床和病理诊断很
难进行确诊，而实验室检测已逐渐成为动物病原微生物确诊的依据。
目前，动物病原微生物实验室检测经常使用的方法主要包括病原学诊
断，血清学诊断、分子生物学诊断。本文对动物病原微生物的实验室
诊断方法进行简要的概括，为实验室诊断的初学者提供一些参考。1
病原学检测1.1涂片镜检
对于送检样品首先一般要进行涂片镜检，首先将样品涂片，然后
根据临床诊断疑似感染病原情况进行染色，常用的染色方法主要有革
兰氏染色、美蓝染色、姬姆萨染色和抗酸性染色法等，最后在光学显
微镜下观察微生物形态，得出初步的结论。对于疑似的病毒性感染需
要进行电镜观察，电镜是以电子束来代替可见光束，观察物体时，分
辨率就没有波长要在可见光谱之内的限制，因此其放大倍数和分辨率
都比光学显微镜高得多。病毒颗粒极其微小，在17-300nm之间，光
学显微镜无法观察，只有电镜才可以发现其形态。1.2分离培养
病原分离是病原微生物检测应用较广泛的方法，细菌、真菌、螺
旋体和支原体需要将样品处理后接种到其特定的培养基中进行扩增培
养，然后划线或涂到固体培养基上进行分离培养，通过其生长形态、
生化特性作出鉴定。立克次体、衣原体、病毒则需要将样品接种到鸡
胚或特定的细胞分离病毒，通过病变情况鉴定病原。分离培养需要的
时间较长，且分离的病原可能不是致病主要因素，但是它是病原微生
物的基本鉴定方法，是病原学检测的基础。1.3动物接种
将样品处理后或分离培养的病原根据其不同的特性接种对待检病
原敏感的实验动物，通过观察其是否发病和发病症状来进行判断，甚
至还可以对发病实验动物继续分离培养病原。分子生物学检测2.1
PCR
乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》
多聚酶链式反应，是目前病原检测的最常用的分子生物学技术，
具有高敏感性的特征，即使少量的感染也可以检出，同时该方法也是
许多其它检测方法的基础。其原理是将样品的基因组DNA提出，在加
热条件下，DNA双链变性分离为单链，加入合成的保守区域的特异性
引物，在合适的温度下和耐热聚合酶的作用下引导DNA的合成，循环
重复后即可得到大量的目的基因片段，经电泳可以检测。RNA病毒需
要提取的是RNA，反转录生成DNA后再进行PCR，即为RT-PCR检
测。目前，PCR技术发展已日趋完善，像实时荧光PCR、套式、多重、
降落PCR已逐渐成为实验室常规检测手段。2.2核酸杂交
核酸杂交技术是较早的应用于病原微生物的检测技术，首先从样
品中提取核酸（DNA或RNA），将此核酸进行变性处理后固定在固相
载体上，加入带有特殊标记物的探针，利用碱基互补原理结合并固定
探针，借助探针上标记的物质可以了解到是否有探针，甚至有多少探
针被固定上去，再由此推知样品中是否含有、甚至含有多少病原微生
物。根据杂交核酸的不同，又可分为Southern印迹法(检测DNA)及
Northern印迹法(检测RNA)。此外，斑点和原位杂交也是常用病原检
测技术。2.3
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