实验五细胞融合.ppt

实验五细胞融合01实验目的03初步掌握聚乙二醇法诱导细胞融合的实验方法。02了解细胞融合的原理实验原理细胞融合是指在自然条件或利用人工方法（生物的、物理的，化学的），使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。利用人工诱导方法，不仅可以使同种细胞发生融合，而且可以使不同种间细胞发生融合。人工诱导的方法很多，如：聚乙二醇（PEG）法、灭活的仙台病毒诱导法、电场融合法等。二、实验内容聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）法的原理：PEG分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲合以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。010203040506实验方法处死蟾蜍。取血：注射器内吸取1mlAlsver液，再吸取1ml蛙血，加入已盛有8mlAlsver液的玻璃离心管。分别取1ml细胞悬液移入塑料离心管中，加入0.85%生理盐水4ml混匀，1200r/min，离心5min。弃去上清液，再加入0.85%生理盐水至5ml，混匀，离心。重复步骤4。收集最后一次离心沉淀的血细胞，加入1mlGKN液混匀。（按压积红细胞体积配成10%的红细胞悬液）010102再加入0.5ml预热的50%PEG混匀，室温下分别于2min、15min取一滴该悬液于干净的载玻片上，盖上盖玻片显微镜下观察。02细胞融合