慢病毒相关技术介绍.pptVIP

TitleofthePresentationcangohere?TitleofthePresentationcangohere?TitleofthePresentationcangohere?**宝日医生物技术（北京）有限公司Clontech

慢病毒相关技术介绍**背景简介病毒载体基因传递慢病毒载体容易转染物理方法非病毒载体Clontech慢病毒相关产品可以转染非分裂细胞实现持久有效表达……逆转录病毒载体腺病毒载体……内容介绍**1提高慢病毒滴度的策略2提高转导效率的方法3Lenti-X慢病毒包装系统1Lenti-X慢病毒包装系统**背景简介**病毒包装流程示意图第四代包装系统—Lenti-X?HTXLenti-XHTX将Gag-Pro和RT-IN分离，降低产生具有复制能力病毒的几率，大大提高生物安全性。创新点I第四代包装系统—Lenti-X?HTXLenti-XHTX引入Tet-Off诱导表达系统，大大提高病毒滴度！创新点IILenti-X包装系统**通过流式细胞仪测定：Lenti-X包装系统获得的病毒滴度高于108IFU/ml；只需10μl病毒上清即可转导大部分HeLa细胞。Lenti-XLenti-XClontech慢病毒系统的优点慢病毒载体的种类**cDNA载体pLVX-PuroRNAi载体pLVX-shRNA1pLVX-shRNA2ProteoTuner载体pLVX-PTunerpLVX-PtunerGreen诱导表达载体pLVX-Tet-OnAdvancedpLVX-Tet-OffAdvancedpLVX-Tight-Puro慢病毒载体的种类**pLVX-EF1α-IRES-PuropLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1/mCherrypLVX-EF1α-AcGFP1-N1C1EF1α启动子载体荧光标签载体pLVX-DsRed-Monomer-C1N1pLVX-AcGFP1-N1C1双表达载体pLVX-DsRed-Monomer-C1N1pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒相关系统**1、慢病毒包装系统高效，可获得的病毒滴度高达5X108IFU/ml具有两种假型病毒：泛嗜性（VSV-G）和单嗜性（ECO）Lenti-XHTXPackagingSystem(631247/49)Lenti-XHTXEcotropicPackagingSystem(631251)2、慢病毒cDNA表达系统高效基因传递系统，可用于几乎所有哺乳动物细胞Lenti-XExpressionSystem(632164)Lenti-XBicistronicExpressionSystem(Neo/Hyg/Puro,632181/2/3)3、慢病毒RNAi表达系统可以获得高效率的RNAi，可用于几乎所有哺乳动物细胞Lenti-XshRNAExpressionSystem(632177)慢病毒相关系统**4、慢病毒诱导表达系统可以在几乎所有哺乳动物细胞中精确地诱导基因表达Lenti-XTet-OnAdvancedInducibleExpressionSystem(632162)Lenti-XTet-OffAdvancedInducibleExpressionSystem(632163)5、慢病毒报告系统利用荧光或化学发光检测法研究启动子活性可用于多种类型细胞Lenti-XDDCyan/Green/RedReporterSystem(631748/51/53)Lenti-XReady-To-GlowSecretedLuciferaseReporterSystem(631746)提高慢病毒滴度的策略**影响慢病毒滴度的因素**转染试剂的类型转染的DNA量转染的DNA质量包装细胞测定滴度转染效率细胞种类细胞密度细胞状态测定滴度时细胞的选择测定方法的选择Clontech提高慢病毒滴度的策略策略使用的病毒载体中包含改善载体性能和提高病毒滴度的WPRE、RRE和cPPT/CTS序列——提供多种病毒载体包