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拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体的构建

摘要：将含有pGADT7-CPK4重组载体的E.coliDH5α的菌液进行质粒提取,利用设计好的突变引物，通过聚合酶链式反应（PCR）的方法获得目的片段，再用琼脂糖凝胶电泳的方法对目的片段进行检测，接着将目的片段进行回收、酶切与连接。再将连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞中，涂布于含有卡那抗性的培养基中培养过夜进行阳性克隆筛选，挑选阳性克隆进行菌落PCR鉴定和测序。结果表明：成功构建了拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体pSPYCE-CPK4(N3)。

关键词：载体构建；基因突变；PCR;凝胶电泳；酶切

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