淋病的实验室诊断-PPT课件.ppt

糖发酵试验

——原理:分解葡萄糖、产酸，pH值降低，酚红由红变黄,溴甲酚紫由紫变黄。——方法：传统的的试验仅作参照方法使用，实际工作中使用1~4小时读结果的改良法。——结果:葡萄糖发酵，麦、乳、蔗糖不发酵。——※注意事项：糖要纯（特别是麦芽糖中含葡萄糖量要小于0.25%）。菌要新鲜（18~24小时的淋球菌菌落）。快速非生长糖发酵微量法用无选择性的巧克力或哥伦比亚琼脂平皿（含5%马血或羊血）转种受检菌株，以获得纯菌。挑取培养18小时~24小时的纯菌2满环（直径3mm）混悬于0.3ml~0.4ml缓冲平衡盐指示溶液（BSS）中，制成浓浊菌悬液。每升BSS中含磷酸氢二钾0.4g，磷酸二氢钾0.1g，氯化钾8g，酚红0.6g，pH值为7.1~7.2。过滤灭菌后储存于4℃冰箱备用。用5支70mm×10mm小试管，在1管~4管中分别加入20%经过滤灭菌的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖溶液各0.05ml。第5管不加糖（对照管）。每管加0.1mlBSS。每管加0.05ml菌悬液，充分混匀。在37℃水浴箱中卵育4小时，观察结果。淋球菌只发酵葡萄糖，不发酵其余的糖，葡萄糖管由红变黄。糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征细菌葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖淋球菌+---脑膜炎球菌++--乳酰胺奈瑟菌+++-灰色奈瑟球菌----布兰汉卡他球菌----淋球菌的鉴定特征菌落形态淋球菌菌落形态革兰染色革兰阴性双球菌氧化酶试验阳性过氧化物酶试验阳性快速糖发酵试验G+L-M-S-淋病实验室检查的其它方法白细胞脂酶快速法ELISA方法（抗原检测）：有症状的男性效果较好：阳性率93.3%，很少有假阳性。女性标本不理想：阳性率87%。可以尿液为标本。：不作为常规筛选的方法。ELISA法（抗体检测）抗体检出率低，50%左右，不能区分既往感染还是现症病人，交叉反应，女性抗体检出率高，亦没诊断价值。非培养诊断技术-核酸检测核酸检测的特点不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件；仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液；不能进行抗生素敏感性试验用于判愈试验需在治疗后至少3周以上进行.淋球菌耐药检测方法

——纸片扩散法——琼脂稀释法——E-test法分子生物学方法(耐药基因检测)纸片扩散法

—原理——方法——结果——临床意义——注意事项纸片扩散法原理

将含药纸片贴到涂有淋球菌的培养基上，药物即扩散到琼脂中。如果淋球菌对此药敏感，则生长被抑制，在纸片周围形成一个透明的抑菌圈。琼脂中药物浓度与纸片距离成反比，距纸片越远药物浓度越小。因而，可根据抑菌圈的大小判定细菌对该药的敏感、中介、耐药纸片扩散法方法

※—菌种和纯化——菌悬液的制备M-H肉汤1*109cfu/ml浓度——菌液涂布——贴纸片——孵育条件：35OC，5%CO2，16~18小时琼脂纸片扩散法琼脂纸片扩散法纸片扩散法临床意义

—最常用的方法——操作简便——影响因素多，结果不够稳定——指导治疗——不适合菌株系统的耐药监测纸片扩散法注意事项

每类药品选一种为代表※——菌悬液制备：一定18~24小时菌苔——贴纸片的时间：菌液涂布后放置3~5分钟，30分钟内一定要贴完※——药物纸片的贮存琼脂稀释法(原理)

将待检菌株种于含有不同抗菌药物的琼脂平皿上，药物浓度小时细菌生长，药物浓度高时细菌生长被抑制，据此可测出药物对该菌的最小抑菌浓度，依标准判定菌是否为耐药菌株方法抗生素贮存液A青霉素：精确秤取3.2mg青霉素，溶于1ml灭菌蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。B四环素：精确秤取3.2mg四环素，溶于1ml灭菌蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。C壮观霉素：精确秤取25.6mg壮观霉素，溶于1ml灭菌蒸馏水--25600μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。D头孢三嗪：精确秤取2mg头孢三嗪，溶于1ml灭菌蒸馏水--2000μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。E环丙氟派酸：精确秤取3.2mg环丙氟派酸，溶于1ml灭菌蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。淋病的实验室诊断概况淋病（gonorrhea）是指由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿生殖器化脓性感染,是法定的乙类传染病主要引起的疾病有：尿道炎、宫颈炎。泌尿生殖器其它部位：附睾炎、前列腺炎、输卵管炎和盆腔炎等全身其它部位（播散性淋病）：淋球菌性关节炎、腱鞘炎、心内膜炎和脑膜炎等合并症。※