放射自显影教学课件.pptVIP

放射自显影;;第一节基本原理;一、潜影的形成和消退;潜影形成步骤;（二）潜影的消退;二、放射自显影的类型;（二）显微镜自显影（lightmicroscopicARG）：又称光学显微镜自显影，是借助显微镜进行组织或细胞学观察，分辨能力要求较高。根据银颗粒来判断示踪剂的分布部位和数量的多少。适用于组织切片、细胞涂片等标本的研究。可以对不同细胞进行比较，并根据不同示踪剂在不同时间的分布，研究细胞水平的代谢过程。制备一般采用液体乳胶法。;;三、常用的感光材料;（一）原子核乳胶;液体乳胶直接涂在标本或支持物上，多用于光镜和电镜自显影。将液体核乳胶涂在玻片上，可抽成核乳胶干板（nuclearemulsionplate），再于标本接触形成自显影像，多用于光镜自显影或宏观自显影。也可将干板将乳胶层从玻片上揭下来，称为揭膜核乳胶（strippingfilmemuslon），多用于定量的光镜自显影。;由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗粒平均直径1μm，对低能β射线敏感度高，对暗室的安全光也有相当耐受。乳胶涂在醋酸纤维素酯片基的单面，乳胶面没有保护层。使用时要注意保护乳胶层面，该面直接与标本接触，以获得最佳灵敏度。主要用于3H标记化合物的宏观自显影或低倍光镜自显影。;（三）X线片（X-rayfilm）;四、常用的放射性核素;五、照相处理;（一）显影和定影;（二）显影液和定影液;D-19b显影液和F-5定影液配方

D-19b显影液配方F-5定影液配方

水（5℃）(ml)700水（5℃）(ml)800

米吐尔（g）2硫代硫酸钠(g)240

无水亚硫酸钠(g)72无水亚硫酸钠(g)15

对苯二酚（g）8.828%醋酸(ml)48

无水碳酸钠(g)48硼酸(结晶)(g)7.5

溴化钾(g)4钾矾(g)15

加水至(ml)1000加水至(ml)1000

;（三）干燥、染色和封固;六、放射自显影的分辨力;半距离（halfdistance，HD）

衡量分辨力常用半距离来表示。即一线性放射源，其显影的银颗粒分散在放射源的两侧，银颗粒随着与放射源的距离的增加而减少，当银颗粒减少到一半时，此距离称半距离。若放射源为点状源则以半半径来表示。;影响分辨力的主要因素：

1、核素的能量：核素的能量越高，射线的射程较长。分散的银颗粒就较多，因而分辨力下降。如在相同条件下，3H、14C、32P的自显影分辨力依次下降。;影响分辨力的主要因素：

2、样品的厚度：样品厚，组织表面和深层中放射源的射线同时射入乳胶层，使银颗粒分散程度加重，影像重叠，分辨力下降。样品薄，则分辨力高，但曝光时间需加长。;影响分辨力的主要因素：

3、乳胶层的厚度：较薄的乳胶层记录的是离放射源最近的径迹起始部，随乳胶加厚，记录的包括径迹起始部和远离放射源的部分，偏离放射源的机会越多，分辨力下降。;影响分辨力的主要因素：

4、样品与乳胶层的间隙：距离大者，射线散射面积也大，影像越不清晰，分辨力下降。;影响分辨力的主要因素：

5、乳胶银晶体大小：显影银颗粒不一定于原有的卤化银位置完全一致，故银晶体越小，则显影银颗粒越小，分辨力就越好。

6、曝光时间：正常曝光时间，核素中占多数的中、低能量射线作用于乳胶，分辨力高。时间过长，则高能射线作用乳胶几率增加，散射加大，分辨力下降。

7、显影时间：显影时间长，可使一些未感光的银粒被还原，使影像界限不清，分辨力下降。;七、放射自显影的本底、效率;自显影的效率：系指待测标本中的放射性核素在曝光时间内，每100次衰变所给出的显影银粒数目。

粗略估计，当3H标本的厚度为1μm、密度为1.1时，光镜自显影中的效率为10%~15%，而厚度为5μm者，效率则为4%~5%（很多深层β粒子不能从标本中射出）。32P标本在同样条件下的效率为30%~40%，在电镜自显影中，3H的效率为25%。;第二节放射自显影的基本方法

及结果分析;一、示踪剂引入的方法;（一）引入途径

1、体内实验：可由静脉、皮下、肌肉、腹腔或直接脑内注射和灌胃等途径引入放射性标记化合物。

2、体外实验：对组织、细胞、体液的培养过程，则可在培养瓶中引入。在离体标本上研究受体等生物活性物质，也常将示踪剂直接加在切片上进行