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实验3:革兰氏染.ppt

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实验内容

一、细菌染色标本观察(操作)(革兰染色法)一、革兰染色法【菌种】齿垢【试剂】生理盐水、革兰染液【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、显微镜等【方法】1、细菌涂片标本的制片革兰染液染色油镜下观察结果由丹麦医生HansChristianGram于1884年创立。细菌涂片的制备器具:接种环(上)和接种针(下)柄约22cm2—5mm绝缘柄约7.5cm金属柄约14.5cm5—8cm安装环(针)的螺口(约8mm)操作原则:无菌操作(烧灼灭菌)Asepticarea10-20cm外焰焰芯内焰细菌涂片的制备菌液采取法【操作步骤】细菌涂片的制备一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片干燥固定使细菌的细胞凝固,使菌体与玻片粘得更牢固;可改变菌体对染料的通透性;加热固定可杀死细菌,比较安全。固定的目的:【操作步骤】革兰染液染色冲洗媒染复染脱色冲洗初染结晶紫1’碘液1’95%乙醇30”复红1’冲洗滤纸干燥油镜观察冲洗紫色(G+)革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色甲菌乙菌初染结晶紫媒染碘液脱色乙醇复染稀释复红紫色(G+)红色(G-)革兰氏染色步骤示意图【结果】细菌被染成紫色者,称为革兰阳性菌;而细菌染成红色者,称为革兰阴性菌;阳性菌——紫色阴性菌——红色细胞壁通透性学说等电点学说化学学说【革兰氏染色法的原理】G-菌细胞壁结构疏松,肽聚糖层薄,含大量脂质,乙醇易渗入。G+菌细胞壁结构致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易进入。通透性学说G+菌等电点(pI2~3)G-菌等电点(pI4~5)在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多,所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固,不易脱色。12等电点学说

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