DNA甲基化调控STAT4的转录影响猪卵泡发育的研究.pdf

摘要

卵泡的成熟是母猪初情启动的首要条件，颗粒细胞的过度凋亡会阻碍卵泡的正常

发育。STAT4（signaltransducerandactivatoroftranscription4）在细胞增殖、凋亡等方

面发挥着重要的作用。团队前期研究发现，成熟卵泡中STAT4基因启动子区的DNA

甲基化水平高于未成熟卵泡，DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR显著升高STAT4基

因的表达量，且STAT4基因可能结合KISS1基因的启动子区调控KISS1基因的表达，

但具体机制不清楚。本研究首先探索了DNA甲基化调控STAT4基因转录表达的机制，

然后研究了STAT4基因调控KISS1基因的转录表达，及其对细胞增殖、凋亡、周期、

雌激素分泌信号通路相关基因的表达、卵泡发育和小鼠初情启动的影响。

本研究的主要结果如下：

（1）STAT4基因启动子区甲基化水平在猪成熟卵泡中显著高于未成熟卵泡，其

mRNA表达量则相反；

（2）超表达STAT4基因促进人卵巢癌COV434细胞系凋亡，抑制人卵巢癌

COV434细胞系增殖、周期及分泌雌激素，干扰则反之；

（3）STAT4基因靶向结合KISS1基因启动子区（-523/-1004）区域，同时超表达

STAT4抑制KISS1基因的表达，干扰STAT4促进KISS1基因的表达；

（4）5-Aza-CdR处理人卵巢癌COV434细胞系后，STAT4基因启动子区甲基化水

平降低，导致其表达量显著升高，从而抑制KISS1基因的表达；同时细胞增殖、细胞

周期及雌激素分泌信号通路相关基因的表达量降低，凋亡信号通路相关基因的表达量

升高；

（5）STAT4慢病毒颗粒侵染卵泡及小鼠后，卵泡及小鼠卵巢内STAT4基因的表

达量显著升高，KISS1基因的表达量显著降低；卵泡表面的毛细血管收缩，小鼠初情

启动日龄延缓且血清中GnRH、LH、FSH、E2等激素的水平降低。

综上，本实验的主要结论是STAT4基因启动子区甲基化水平降低，促进STAT4基

因的转录，进而抑制KISS1基因表达，促进细胞凋亡，抑制细胞增殖，最终抑制猪卵

巢卵泡的正常发育。

关键词：卵泡发育；颗粒细胞；DNA甲基化；STAT4

I

英文缩略词

缩略词英文全称中文全称

CDSCodingsequence编码序列

cDNAComplementaryDNA互补DNA

ChIPChromatinimmunoprecipitation染色质免疫共沉淀

ddHODoubledistilledwater双蒸水

2

DMEMDulbecco’smodifiedeaglemedium细胞培养基

EBEthidiumbromide溴化乙锭

bpBasepair碱基对

Ampampencillin氨苄青霉素

FBSFetalbovineserum胎牛血清

FSHFollicle-Stimulating-Hormone卵泡刺激素

GnRHGonadotropinReleasingHormone促性腺激素释放激素

LHLuteinHormone