微生物的遗传变异与育种.ppt

基因突变与诱变育种4)设计和采用效率高的筛选方案和方法初筛：平板上做定性、半定量的测定，观察突变株

的生理效应范围。方法：梯度平板法；（抗性菌株）纸片法；（抗性菌株）透明圈法；（淀粉酶产生菌株等）变色圈法；（氨基酸生产菌株）如：用梯度平板法筛选抗性菌株基因突变与诱变育种抗生素法直接筛选抗药性突变体基因突变与诱变育种复筛：1较精确的生物化学分析方法——做摇瓶测定（见P250）2基因突变与诱变育种3三、营养缺陷型的筛选（一）概念：基因突变与诱变育种1.三种遗传型个体营养缺陷型（auxotroph）：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌株。如：lys-;bio-;野生型(wildtype)：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。如：lys+;bio+;原养型(prototroph)：指auxo突变菌株回复突变或重组后产生的菌株，与野生型的表型相同。筛选用的培养基基本培养基（minimalmedium,MM）[-]：满足野生

型菌株营养要求最低成分的组合。完全培养基（completemedium,CM）[+]：满足一

切auxo生长的天然或半组合培养基。补充培养基（supplementedmedium,SM）[x]：在

MM中有针对性地加入一或几种营养成

分以满足相应auxo生长的组合培养基。0102基因突变与诱变育种auxo的鉴定基因突变与诱变育种诱变处理auxo的浓缩auxo的检出（二）筛选方法诱变处理（同前）auxo的筛选程序：基因突变与诱变育种细菌培养离心洗涤诱变处理CM后培养洗涤MM加PN涂布于CM平板影印培养挑取鉴定菌种保存2.auxo的浓缩：基因突变与诱变育种抗生素法：原理：青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生长着的微生物细胞，对休止态细胞无作用。方法：菌培养在含抗生素的MM基中。2）菌丝过滤法：适用于丝状

（放线菌、

霉菌）原理：基本培养基上只有发育成菌丝；auxo孢子可通过滤膜，野生型菌丝不能通过。01基因突变与诱变育种02基因突变与诱变育种3）差别杀菌法：基本培养基上只有野生型生长，加热杀死野生型营养体，保留auxo芽孢。细菌——80℃酵母——60℃适用于产芽孢、孢子菌。基因突变与诱变育种3.auxo的检出逐个检出法影印平板培养法01限量补充法（在mm中加0.01%蛋白胨，auxo菌落小，野生型菌落大）02基因突变与诱变育种03夹层培养法4.auxo的鉴定基因突变与诱变育种生长谱法方法简便；回变和污染不影响结果测定物质可为粉末或纸片混合氨基酸法步骤：a.将多种营养因子编组，如：一组：12345二组：26789三组：37101112四组：48111314五组：59121415基因突变与诱变育种2）混合氨基酸（Vit）法1）每组内无重复的营养因子2）每组中应包含只出现一次的因子3）每组中其他因子应分别出现二次营养因子分组编排时注意：基因突变与诱变育种a.将多种营养因子编组，如：一组：12345

二组：26789

三组：37101112

四组：48111314

五组：59121415b.将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养

c.结果分析作为标记菌株：进行基因工程、诱变育种、01代谢过程的研究中的亲本标记；作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种；作为aa、维生素、碱基的测定菌株。02基因突变与诱变育种5.auxo的应用本节内容：02真核生物的基因重