抗原抗体反应的应用.ppt

(4)ELISA技术类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体，在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体，酶标记的抗原或抗体，酶作用的底物。①双抗体夹心法(直接夹心法）特点：常用于抗原的检测所用两种抗体分别针对同一个抗原分子的不同抗原决定簇非竞争结合反应适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原的检测②间接法捕获法（反向间接法）主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。直接法用酶标记的抗原或抗体直接检测包被在酶标板上的抗体或抗原，其量与产物颜色成正比。基本原理：利用酶标抗体结合抗原形成复合物后，标记酶的活性发生改变的原理，在不将复合物与游离酶标抗体分离的情况下，直接测定系统中总的标记酶活性的改变，进而推算出待检样品中的抗原量。01主要用于小分子抗原或半抗原的检测.023、均相酶免疫吸附测定酶放大免疫测定技术:（enzyme-multipliedimmunoassaytechnique，EMIT）基本原理:半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性。当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受影响而活性被抑制。斑点酶免疫试验(dot-ELISA)荧光化合物：异硫氰荧光素、罗丹明荧光素。概念：以荧光素作为示踪物，通过荧光显微镜观察进行定位检测。3.荧光与发光免疫分析基本原理利用荧光素标记抗体，使之在涂片上或组织切片上与标本中的待检抗原特异结合，采用高发光效率的点光源，透过滤色板发出一定波长的光，使结合在标本上的荧光素被激发而产生荧光，借助荧光显微镜观察底物片上荧光染色形态，来判断有无待检抗原或抗体。荧光免疫测定技术——

时间分辨荧光免疫分析法原理：稀土铕离子Eu3+螯合物标记抗体后，抗体与固相抗原结合，抗体上的Eu3+在紫外光（340nm）激发下，与增强液中的β-二酮体重新形成一种微胶体螯合物，发出长寿命的高强度荧光（613nm），比未激发时增强了100万倍，可用时间分辩荧光计记录。第三节抗原抗体反应的应用一、免疫沉淀与免疫凝集二、免疫标记三、免疫定位分析四、抗原抗体反映的其他应用一、免疫沉淀与免疫凝集溶液中的环状沉淀试验在体外可溶性抗原与相应抗体形成肉眼看见的沉淀物。在液相中形成的沉淀不容易观察判断，利用抗原和抗体溶液之间的界面形成的沉淀线便于观察。对照1:101:201:401:801:160抗血清稀释度抗原沉淀线抗血清环状沉淀实验示意图2.凝胶扩散沉淀抗原抗体在半透明的半固相介质中进行沉淀实验。抗原分子与抗体分子在凝胶介质中自由扩散，相遇形成沉淀。以琼脂扩散实验较为常用。单向免疫扩散：抗体混于琼脂中，小孔中加入抗原，抗原向周围均匀扩散，与抗体形成沉淀环。可用于定量测定免疫球蛋白和补体的含量等。双向免疫扩散：抗原和抗体向周围扩散后可在两孔之间形成白色沉淀线，可用于抗原或抗体的定性检测。缺点：时间长，灵敏度低。沉淀环单向免疫扩散：常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。抗体混于琼脂凝胶中制板环的直径与抗原含量成正相关双向免疫扩散——沉淀线形状的变化显示抗原间是否存在共同的抗原决定簇。AbAg1，3AbAb010203血清免疫电泳：患者血清和正常人血清分别放在凝胶上近负极端的小孔中进行电泳分离后，在两种抗原之间沿电泳方向挖一平行的小槽，加入抗血清进行双扩散。火箭电泳：单向免疫扩散与电泳结合的一种方法。在电场作用下抗原向正极扩散，与抗体形成沉淀峰（火箭型沉淀线）。需时短，能检测微量抗原。对流电泳(电渗析)：在电场作用下抗原与抗体相对扩散，形成沉淀线。对流电泳较双扩快速和灵敏。3.电泳条件下的沉淀反应在溶液中两种或两种以上蛋白质相互作用，可以通过免疫共沉淀惊醒鉴定和分离。01如果第一抗体结合后再加入第二抗体或A蛋白可使抗原抗体形成更大的复合物易于沉淀，也可通过加入聚乙二醇破坏水化膜加速沉淀形成。03蛋白质相互作用通过非共价结合，用针对其中一种蛋白质的特异性抗体进行的免疫沉淀，与该蛋白相互作用的其他蛋白也同时被沉淀下来。020102034.免疫共沉淀免疫共沉淀原理图解大颗粒性抗原如细胞或细菌等与相应的抗体结合后能使康媛颗粒发生凝集，形成肉眼易见的凝集小块，即为免疫凝集。凝集反应的发生分为两个阶段：1、抗原抗体的特异性结合阶段；2、出现肉眼可见的凝集现象。5.免疫凝集最常见的免疫凝集反应是红细胞凝集，即血凝反应。血凝反应的抗体识