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25.(11分〉研究发现拟南芥受体蛋白激酶TMKl可调控ABA信号通路,磷酸酶ABil蛋白
功能缺失突变体对ABA敏感,蛋白激酶迫信号转
SnRK参与逆境胁迫及ABA应答,在胁
导中起促进作用,进而调控植物对逆境胁迫的响应,其活性受ABil的影响。为研究
TMK和ABi之间是否存在相互结合及其他相关机制,科研人员构建了ABil-MYC和
TMKl-GFP过表达载体,其中MYC和GFP均为标签基因,拟南芥细胞为受体细胞。
TMKl-GFP载体构建过程如图所示。
2
Fl:S-0《AG/飞.CNN1234-3F:S-OMGACNNl234-3
刷了T�A+吃早GMG·S:R’
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v
RB
TMK!-GFP过表达载体部分信息
注:LBIRB:T-DNA的左右边界序列;ka旷:卡那iU肯抗性基因
BbsI归
3气C1TCTONNNNNN-5JCITA,\05
N代表任哺基tt
(1)通过PCR技术使用图中引物分别扩增得到TMK基因和GFP基因,上述两基因和
使用的空载体(填“能”或“不能”)在同一个反应体系中经BbsI酶切并连接至载体M
点处。已知两基因内部均不含BbsI酶切位点和EcoRI酶切位点,空载体上只含图示上的
EcoRI酶切位点;引物Fl中的1234形成回文结构(回文结构是指1、4和2、3位置的碱基互
补的序列)的种类为种;用限制酶酶切法和琼脂糖凝胶电泳鉴定重组载体的过程中,
EcoRI(填“能”或“不能”〉酶切重组载体,理由是
(2)ABil-MYC
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