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生物素、亲和素标记技术广州医学院第一附属医院检验科廖伟娇一、生物素及其理化性质1概念2分子式结构特点溶解特性等电点其它特性概念：01生物素(biotin)是动、植物体内广泛分布的一种小分子生长因子，又名辅酶R或维生素H。02分子式：03C10H16O3N2S分子量：244.3104溶解特性：咪唑酮环/四氢噻吩环结合亲和素侧链末端羧基结合蛋白质难溶于水，易溶于二甲基甲酰胺(DMF)结构特点：等电点：PH=3.5其它特性：羧基需经活化修饰才能结合蛋白质（羧基活化的生物素，称为活化生物素，也叫生物素衍生物）01生物素衍生物的种类及特性：02生物素羟丁酰亚胺酯(BNHS)：03DMF04制备：生物素+N-羟基琥珀酰亚胺05二环己基碳二亚胺06标记特点：07BNHS中的羧基与蛋白质中的赖氨酸氨基08结合达到标记的目的09适用于：标记Ab、酶、中性或偏碱性Ag、DNA01长臂活化生物素(BCNHS)：02DMF+6-氨基己酸03制备：生物素+N-羟基琥珀酰亚胺04二环己基碳二亚胺05(在BNHS的B与羧基之间插入2分子的6-氨基己酸）06标记特点:(同BNHS)07BCNHS中的羧基与蛋白质中的赖氨酸氨基结合达到标记的目的08适用：(同BNHS)标记Ab、酶、中性或偏碱09性的Ag、DNA生物素酰肼(BHZ)：制备：生物素+水合肼标记特点：BHZ与蛋白质中的醛基结合而标记适用：标记偏酸性的蛋白质、酶、DNA010302亲和素及其理化性质概念分子式结构特点溶解特性等电点其它特性概念：亲和素(avidin)：是动物微生物中提取的一种含10%碳水化合物的碱性糖蛋白。链霉亲和素：是从链球菌属的菌培养液中提取的一种蛋白质分子量：A:6.7KDSA:6~6.5KD结构特点：每分子由四个亚基组成溶解特性：溶于水，C=5mg/ml等电点：A:PH=10.5SA:PH=6.0比活性：A≥12u/mgPSA≥14u/mgP亲和素的活性及其测定亲和素的活性：是表示亲和素结合生物素的能力，即：ugB/mgA或ugB/mgSA。01活性测定：02羟基偶氮苯-2-羧酸(HABA)法：03A(SA)+HABA（红色）BA-B04（出现黄色时B的量）05分光光度法：生物素标记物及亲和素标记物的制备：生物素标记物的制备：B+Ab/Ag/E交联剂B-Ab/Ag/E亲和素标记物的制备：A/SA+Ab/Ag/E交联剂A/SA-Ab/Ag/E六、技术类型：可有Ag与Ab反应的各种免疫方法：夹心法、间接法、竞争法等，在次基础上引入A-B系统。BAB法：Ag+B·AbAg-Ab·BAAg-Ab·B-AB·EAg-Ab·B-A-B·E特点：以游离A分别连接B-Ab和B-E返回BA法：01Ag+B·AbAg-Ab·BA·EAg-Ab·B-A-B·E02特点：以A-E/SA-E代替BAB法中的A，省03却了加B-E的步骤0401ABC法：02A+B·EA-B·E----------ABC03Ag+B·AbAg-Ab·BABCAg-Ab·B-ABC04特点：将BAB法中的A先与B-E结合，制备成复合物ABC