烟草青枯病菌胶体金免疫层析检测试纸条的研制.pdf

目录

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摘要I

ABSTRACTIII

第一章文献综述1

1烟草青枯病菌的研究现状1

1.1生物性状1

1.2发病症状1

1.3寄主范围3

1.4发病特点3

1.5病害循环3

1.6病害防治4

2烟草青枯病菌检测技术的研究进展5

2.1传统检测技术5

2.2免疫学检测技术5

2.3分子生物学检测技术7

3胶体金免疫层析检测试纸条技术的研究与应用9

4胶体金免疫层析试纸条的工作原理9

5本研究目的与意义10

第二章烟草青枯病菌抗体的制备13

1材料与方法13

1.1试验材料、试剂与仪器13

1.2烟草青枯病菌免疫原与包被原的制备15

1.3BALB/c小鼠免疫方法15

1.4融合小鼠的选择16

1.5骨髓瘤细胞（Sp2/0细胞）的复苏与培养17

1.6细胞融合试验18

1.7单克隆抗体的大量制备22

1.8多克隆抗体的制备与处理23

1.9抗体的稳定性分析24

2结果与分析24

2.1融合小鼠的选择24

2.2融合细胞效价的测定25

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烟草青枯病菌胶体金免疫层析检测试纸条的研制

2.3抗体亚型的测定25

2.4单克隆细胞株和多抗的广谱性测试26

2.5抗体纯化效果及稳定性分析27

3结论与讨论27

3.1小鼠及其免疫方案的选择27

3.2细胞融合27

3.3单克隆抗体的制备和筛选28

第三章烟草青枯病菌胶体金免疫层析检测试纸条的制备29

1材料与方法29

1.1试验材料29

1.2胶体金溶液的制备30

1.3金标偶联抗体的制备31

1.4样品的制备33

1.5试纸条的组装及检测原理33

1.6试纸条的优化35

1.7试纸条的应用评估36

2结果与分析36

2.1试纸条的可行性分析36

2.2试纸条工作条件优化的结果分析36

2.2试纸条的分析评估40

3结论与讨论44

全文总结45

1总结45

1.1烟草青枯病菌抗体的制备45

1.2烟草青枯病菌胶体金免疫层析检测试纸条的制备45

2创新点46

3不足之处46

参考文献47

附录53

致谢57

攻读学位期间发表的学术论文59

ii

摘要

烟草青枯病菌胶体金免疫层析检测试纸条的研制

摘要

烟草青枯病是一种典型的土传性维管束病害，病原物为茄科劳尔氏菌

Ralstoniasolanacearum

（），可侵染烟草的根、茎、叶等多个部位，除烟草外，茄科

劳尔氏菌还可侵染生姜、辣椒等经济作物，也可感染马铃薯、茄子、番茄等茄科蔬

菜。烟草青枯病广泛分布于中国、日本、美国、印度尼西亚、澳大利亚等多个国家，

在中国的长江流域和南部烟区广泛流行。田间发病时往往发展迅速，导致烟草减产

严重，防治难度较大，造成严重的经济损失。为了控制病害的发生，减少损失，做

好病原菌的检测与监测是关键，因此，建立一种特异性强、灵敏度高、快捷简便的

适用于田间筛查烟草青枯病的检测方法十分重要。