荧光标记噬菌体检测K1荚膜大肠杆菌方法的建立及噬菌体解聚酶功能的研究.pdf

本研究由国家重点研发计划（2019YFC1605400）资助

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ProgramofChina（2019YFC1605400）

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摘要I

ABSTRACTIII

缩略语中英文对照V

第一章噬菌体检测病原菌的方法及噬菌体解聚酶的研究进展1

1K1荚膜大肠杆菌概述1

2检测大肠杆菌的方法1

2.1传统检测方法1

2.2免疫学方法2

2.3PCR法3

2.4环介导等温扩增法4

2.5基因芯片法4

2.6生物传感器法4

3利用噬菌体检测致病菌的方法5

3.1噬菌体扩增法5

3.2报告噬菌体法6

3.3噬菌体与免疫学方法联用6

3.4噬菌体与发光试剂联用6

3.5噬菌体与生物传感器联用7

3.6其他方法8

4噬菌体解聚酶概述8

5噬菌体解聚酶的应用9

5.1细菌检测和血清型鉴定9

5.2控制细菌生物被膜9

5.3治疗细菌感染9

参考文献10

第二章荧光标记噬菌体检测K1荚膜大肠杆菌方法的建立19

1材料与方法20

1.1主要仪器20

1.2主要试剂20

1.3菌株及噬菌体20

i

K1

荧光标记噬菌体检测荚膜大肠杆菌方法的建立及噬菌体解聚酶功能的研究

1.4噬菌体与细菌的培养23

1.5K1荚膜大肠杆菌的PCR鉴定23

1.6荧光噬菌体的制备与收集24

1.7荧光PNJ1809-36噬菌体侵染宿主菌的最适时间测定24

1.8特异性测定25

1.9灵敏度测定25

1.10模拟粪样检测25

1.11模拟奶样检测25

1.12死菌检测25

1.13荧光噬菌体的保存稳定性检测26

2结果26

2.1K1荚膜大肠杆菌的PCR鉴定结果26

2.2荧光噬菌体的效价28

2.3荧光PNJ1809-36噬菌体侵染宿主菌的最适时间28

2.4特异性检测结果30

2.5灵敏度检测结果33

2.6模拟粪样检测结果34

2.7模拟奶样检测结果35

2.8死菌检测结果36

2.9荧光噬菌体的保存稳定性37

3讨论38

参考文献41

第三章噬菌体解聚酶及其截短蛋白功能的研究45

1材料与方法46

1.1主要仪器46