生物技术制药04医药生物制品.ppt

在设计核酸疫苗时必须保证质粒ＤＮＡ不与宿主动物发生基因整合。现有的研究表明,接种核酸疫苗既不出现针对质粒载体本身的应答,又不会出现抗ＤＮＡ抗体,但仍需经过大量的试验来证实这一点。ＤＮＡ质粒长期表达外源抗原,是否会影响机体的免疫系统,导致免疫耐受或对其它抗原的免疫抑制。如果免疫应答过强,是否会出现自身免疫及过敏反应。核酸疫苗存在的问题⑵沉淀反应可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在下，可出现肉眼可见的沉淀现象称为沉淀反应。反应中的抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。例如：免疫扩散或免疫电泳的抗体组成、含量！⑶补体参与的反应单击此处添加大标题内容①溶血和溶菌反应②补体结合反应待检系统：已知抗体与待检抗原/已知抗原与待检抗体指示系统：绵羊红细胞和溶血素补体：新鲜豚鼠血清结果判断：不溶血——阳性；溶血——阴性⑷中和试验抗体使相应的毒素的毒性消失的试验称为中和试验。中和试验常用于毒素的鉴定。⑸免疫标记测定技术是指用酶、荧光素或放射性同位素等标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。用于定性、定量或定位检测标记物的敏感性+抗原抗体反应的特异性酶联免疫吸附分析法免疫荧光技术放射免疫测定法间接法双抗体夹心法竞争法①基本原理②关键技术③ELISA的常用方法④ELISA的应用酶联免疫吸附分析法enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA①基本原理固相包被技术酶交联技术关键技术：通过酶标记技术，将抗原抗体反应的特异性和酶催化作用的高效性相结合，利用酶反应底物的颜色变化来判断结果。01常用聚苯乙烯微量反应板：03样品量少使用方便重复性好02固相包被技术04优点：Ⅱ酶交联技术常用的酶：辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酯酶（AP）交联方法：戊二酸法、过碘酸法酶反应底物显色变化测定波长/nmHRPAP邻苯二胺邻联甲苯胺对硝基苯磷酸酯黄色405桔红色492蓝色425?③ELISA的常用方法间接法双抗体夹心法竞争法（测定抗体）（测定抗原）（定量测定）Ⅰ间接法（用于测定抗体）包被洗板加样加显色底物洗板判断结果加酶标抗体单击此处添加正文。Ⅱ双抗体夹心法（测定抗原）SandwichELISAAddsubstrateandmeasurecolorAntibodycoatedwellAddantigenAddenzymeconjugatedsecondaryantibodyⅢ竞争法（定量测定）?YYY待测管EEEYYYE样品▲▲▲▲▲▲YYYE▲▲▲▲▲▲▲参考管YYYEEEYYYEEE▲▲▲▲▲▲▲YYYEEE▲▲▲▲▲▲酶标抗原不加样品底物④ELISA的应用Ⅰ用已知的抗体鉴定未知抗原各种微生物的鉴定、生物体内大分子物质、细胞表面分子的测定。用已知的抗原去测定未知抗体例：胰岛素、干扰素等药物的免疫测定二、细胞免疫测定法T细胞总数的测定添加标题T细胞亚群的测定添加标题淋巴细胞转化试验添加标题NK细胞活性测定添加标题IL-2的测定添加标题药物的免疫测定法1?2Ⅱ??免疫学预防一、获得免疫力的方式自然获得性免疫人工获得性免疫人工自动免疫：人工被动免疫：给机体接种抗原，使机体主动地建立起针对该抗原的免疫应答。给机体注入特异性抗体或细胞因子等，使机体获得特异性免疫。人工自动免疫与人工被动免疫的比较人工自动免疫人工被动免疫免疫材料抗原(菌苗、疫苗、类毒素)抗体或细胞因子免疫力出现时间晚（1~4周）早（立即）免疫力维持时间长（数月~数年）较短（2周~数月）用途主动用于预防