植物磷脂酸(PA)特异性分子探针设计与应用.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

缩略词表VII

第一章文献综述1

1植物膜系统及其磷脂组成1

2PA的合成及其功能2

3生物探针3

3.1PA与蛋白的相互作用3

3.2其他磷脂的生物探针研究进展4

3.3PA生物探针的研究进展4

4磷脂参与调控逆境胁迫研究进展5

4.1PA与盐胁迫6

4.2PA与ABA6

4.3磷脂与高温胁迫7

4.3.1热胁迫与PIP7

2

4.3.2热胁迫与PA8

4.3.3热胁迫信号转导8

5本研究的目的意义9

第二章磷脂酸特异性分子探针的设计11

1材料与方法11

1.1植物材料11

1.2拟南芥的生长条件与处理11

1.3质粒构建11

1.3.1引物设计及PCR扩增11

1.3.2双酶切12

1.3.3同源重组13

1.3.4转化大肠杆菌13

1.3.5鉴定阳性菌落13

1.3.6农杆菌转化14

1.3.7侵染拟南芥以及烟草14

1.4重组蛋白免疫印迹分析15

1.4.1重组蛋白表达及纯化15

1.4.2SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳16

1.4.3免疫印迹分析18

1.5拟南芥基因组DNA的提取和鉴定18

1.5.1SDS方法提取拟南芥DNA18

1.5.2鉴定突变体PCR体系及程序18

1.6ELISA显色实验19

1.7细胞染色19

1.8激光共聚焦检测以及分析19

1.9脂质处理19

1.10花粉萌发实验20

1.11黑暗处理20

2结果与分析20

2.1N160与PA有较强的结合能力20

2.2PA探针的构建22

2.3亚细胞定位GFP-N160RbohD的构建25

2.4GFP-N160RbohD特异性指示PA分布变化28

第三章盐胁迫和ABA刺激下PA的动态分布31

1材料与方法31

1.1植物材料31

1.2拟南芥的生长条件31

1.3拟南芥基因组DNA的提取和鉴定31

1.3.1SDS方法提取拟南芥DNA31

1.3.2鉴定突变体PCR体系及程序31

1.4NaCl、ABA处理32

1.5药物处理32

1.6生长素处理33

1.7植物蛋白提取及免疫印迹分析33

1.7.1植物蛋白提取33

1.7.2SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳33

1.7.3免疫印迹分析34

1.8激光共聚焦检测以及分析34

2结果与分析34

2.1盐胁迫诱导PA细胞质膜处积累34

2.2ABA诱导PA细胞质膜处积累36

2.3NaCl和ABA诱导产生的PA主要来源于PLD的代谢水解37

2.4双突变体pldα1pldδ中NaCl、ABA不诱导PA在PM处积累38

2.5生长素不影响膜上PA的水平40

第四章高温胁迫刺激下PA的动态分布