2025年分子生物学实验操作考核试题及评分标准 .pdfVIP

英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》

分子生物学操作考核试题及评分标准

实验一：

质粒DNA的提取和纯化

步

考核目标及评分细则满分值

骤

1.明确实验目的（2分）

一5

2.理解实验原理（3分）

1.选择恰当的药品和仪器（2分）

二5

2.熟悉药品的配制（3分）

1.熟悉实验步骤（5分）

三10

2.清除实验注意事项（5分）

进行实验：

1、实验准备：制备含有相应抗生素的固体和液体LB培养基，将保存的

菌液涂布到固体培养基平板上培养单菌落（1～2天）。（5分）

2、挑取单菌落在含有对应于某一抗生素(如Amp或Kan)的LB培养液

（25mL）中接种，37℃振荡培养过夜，使细菌处于对数生长期（约

12－16个小时）。（5分）

3、吸取10mL培养液于eppendorf管中，12000rpm离心5分钟，弃去上

清液，可用微量移液器适当吸取残余上清。细菌沉淀于管底。（5分）

4、加入1mL溶液Ⅰ，用手指或涡旋振荡器剧烈弹震，使菌体充分悬浮，

室温下静置5min。（5分）

5、加入2mL新配制的溶液Ⅱ，盖紧管盖，上下温和颠倒eppendorf管2

－3回，以混匀内容物（千万不要剧烈振荡）,冰浴静置5min。（5分）

6、加入1.5mL浴冷的溶液Ⅲ，上下颠倒混匀数次，冰浴条件下静置5min。

四（4分）65分

7、12000rpm离心10min，将上清液移至新的eppendorf管中（约400µL）。

（4分）

8、加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），充分振荡混匀，12000rpm

离心5min。（5分）

9、吸取上层水相至新的离心管中，加入十分之一体积量的3mol/L的

pH5.2NaAc,再加入2倍体积（约1mL）的预冷的无水乙醇。（5分）

10.放入－20℃冰箱中静置30分钟，12000rpm离心15min。（4分）

11.弃去上清，加入1mL预冷的70%乙醇，12000rpm离心5min，洗涤沉

淀。（5分）

12.弃去上清，沉淀在室温下自然干燥。然后加入40µLTE溶液。（4分）

13.取5µL的质粒与2µL的6X上样缓冲液混合后，在0.8％的琼脂糖凝胶

上电泳检测。（5分）

14.将所获得的质粒DNA样品置于4℃冰箱中备用。