鸭源鹅细小病毒的分离鉴定与致病性研究.pdf

本研究由江苏省农业科技自主创新资金

（CX(19)3002）资助

ThisstudywassupportedbyJiangsuAgricultureScience

andTechnologyInnovationFund(CX(19)3002)

目录

摘要I

ABSTRACTV

缩略语中英文对照IX

本研究的目的及意义XI

第一部分文献综述1

第一章水禽细小病毒研究进展1

1病原学1

1.1形态结构与理化性质1

1.2基因结构特点2

1.3非结构蛋白NS2

1.4结构蛋白VP3

2临床症状3

3流行病学4

4检测方法5

4.1病毒形态学观察5

4.2病毒的分离培养5

4.3血清学诊断方法6

4.4分子生物学诊断方法7

5防治8

参考文献10

第二部分试验研究19

第二章鸭源鹅细小病毒的分离鉴定19

1方法与材料20

1.1试剂耗材20

1.2仪器设备20

1.3溶液配制20

1.4病料处理20

1.5病毒的分离培养20

1.6病毒的PCR鉴定21

1.7D-GPV的全基因组扩增22

1.8PCR产物纯化回收23

1.9序列分析23

2结果26

2.1样品PCR鉴定26

2.2鸭源鹅细小病毒在鸭胚上的传代26

2.3病毒分离与纯净性检测27

2.4全基因序列比对28

2.5VP基因的序列比对30

2.6NS基因的序列比对41

3讨论49

4本章小结49

参考文献51

第三章实时荧光定量PCR检测鸭源鹅细小病毒方法的建立55

1材料与方法55

1.1毒株55

1.2试剂55

1.3实验设备56

1.4溶液配制56

1.5引物的设计与合成56

1.6标准品的制备56

1.7标准曲线的绘制57

1.8特异性试验57

1.9敏感性试验57

1.10重复性试验58

2结果58

2.1重组质粒的鉴定与浓度测定58

2.2标准曲线的绘制58

2.3特异性试验的结果59

2.4敏感性试验的结果60

2.5重复性试验的结果60

3讨论61

4本章小结61

参考文献62

第四章鸭源鹅细小病毒对2日龄雏鸭的致病性研究65

1试验方法与材料65

1.1毒株与实验动物65

1.2试剂66

1.3设备66

1.4试验