一种新型几丁质酶ActChi的酶学性质与改造研究.pdf

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摘要I

ABSTRACTIII

缩略语及专有词汇检索表V

第一章文献综述1

1几丁质1

1.1几丁质的来源1

1.2几丁质的分类1

1.3几丁质的降解方法2

1.4几丁质的应用2

2几丁质酶3

2.1几丁质酶简介3

2.2几丁质酶的分布3

2.3几丁质酶的分类与结构4

2.4几丁质酶的催化机理6

2.5几丁质酶的结构域7

2.6几丁质酶的持续水解性9

2.7几丁质酶的应用10

3本论文研究内容、目的及意义10

3.1研究内容、目的及意义10

3.2研究技术路线11

第二章几丁质酶ACTCHI的生化特性研究13

1实验材料14

1.1质粒与菌株14

1.2培养基14

1.3主要试剂与底物14

1.4实验仪器15

2方法15

2.1生物信息学分析15

2.2基因合成16

i

一种新型几丁质酶ActChi的酶学性质与改造研究

2.3重组质粒转化16

2.4蛋白质的表达与纯化17

2.5酶学特性的表征18

3结果与分析19

3.1生物信息学分析19

3.2表达与纯化22

3.3酶学性质22

3.4酶动力学参数24

4讨论与总结26

4.1讨论26

4.2本章小结28

第三章融合几丁质酶的构建与研究29

1实验材料30

1.1质粒与菌株30

1.2几丁质结合结构域的序列及融合几丁质酶的构建30

1.3培养基30

1.4实验试剂30

2实验方法31

2.1几丁质结合结构域同源建模与序列比对31

2.2表达与纯化31

2.3酶学性质表征31

3结果与分析31

3.1融合几丁质酶的构建31

3.2几丁质结合结构域的序列比对32

3.3融合几丁质酶的表达与纯化32

3.4pH和温度对融合几丁质酶的影响33

3.5融合几丁质酶的热稳定性34

3.6融合几丁质酶对胶体几丁质酶动力学参数35

3.7融合几丁质酶对结晶几丁质水解活性比较35

4讨论与总结36

4.1讨论36

4.2本章小结37

第四章几丁质酶突变体构建与研究39

ii

1实验材料39

1.1质粒与菌株39

1.2引物合成39

1.3培养基40

1.4试剂40

1.5主要仪器40

2实验方法40

2.1突变位点的选择40

2.2引物设计40

2.3PCR与测序41

2.4突变体的表达、纯化、与酶学性质表征42

3结果与分析43

3.1突变位点的选择43

3.2突变体Y54W的表达与纯化43

3.3pH和温度对突变体Y54W的影响44

3.4突变体的热稳定性45

3.5突变体对胶体几丁质的酶动力学参数46

3.6突变体对结晶几丁质水解