鸭坦布苏病毒诱导鸭睾丸组织细胞凋亡的实验研究.pdf

本研究由国家自然科学基金资助

ThisstudywassupportedbyNationalNaturalScience

FoundationofChina(No

目录

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摘要I

ABSTRACTIII

缩略语中英文对照VII

本研究目的意义IX

第一篇文献综述1

第一章鸭坦布苏病毒的研究进展1

1鸭坦布苏病毒病原学特性1

1.1鸭坦布苏病毒结构特征1

1.2鸭坦布苏病毒的理化特性和体外培养2

1.3鸭坦布苏病毒的生活史3

2鸭坦布苏病毒流行情况4

3鸭坦布苏病毒的临床诊断5

3.1鸭坦布苏病毒引发的临床症状5

3.2鸭坦布苏病毒引发的病理组织学变化6

3.3鸭坦布苏病毒诊断方法6

4鸭坦布苏病毒的疫苗和药物研究8

参考文献11

第二章细胞凋亡研究进展17

1细胞凋亡的进程以及形态变化17

1.1细胞凋亡的进程17

1.2细胞凋亡的形态学变化18

2细胞凋亡的途径19

2.1外源性细胞凋亡途径19

2.2内源性细胞凋亡途径19

3黄病毒与细胞凋亡21

参考文献23

第二篇试验研究27

第三章鸭坦布苏病毒感染鸭睾丸组织显微及超微病理变化27

1材料和方法28

1.1实验材料28

1.2实验方法29

2结果30

2.1鸭坦布苏病毒感染不同时期鸭睾丸组织结构变化30

2.2鸭坦布苏病毒感染不同时期鸭睾丸组织凋亡细胞检测32

2.3鸭坦布苏病毒感染不同时期鸭睾丸组织的超微结构变化33

3讨论37

4本章小结39

i

目录

参考文献41

第四章鸭坦布苏病毒感染鸭睾丸组织细胞凋亡的分子机制45

1材料和方法46

1.1实验动物和毒株46

1.2实验抗体和试剂46

1.3实验主要仪器46

1.4RNA提取和反转录47

1.5实时荧光定量PCR48

1.6电镜观察49

1.7蛋白样品制备和免疫印迹49

1.8统计分析50

2结果50

2.1DTMUV感染鸭睾丸组织凋亡相关基因定量表达50

2.2透射电镜下凋亡生精细胞中线粒体的变化52

2.3DTMUV感染鸭睾丸组织凋亡相关蛋白表达变化53

3讨论56

4本章小结58

参考文献59

第五章鸭睾丸组织透射电镜样品制作及尿囊液病毒分离步骤优化61

1材料和方法61

1.1病料收集61

1.2鸭胚接种62

1.3透射电镜观察62

2结果63

2.1睾丸组织中病毒颗粒鉴定63

2.2鸭胚尿囊液病毒分离步骤优化65

3讨论65

4本章小结67

参考文献69

全文总结71

致谢73

ii

摘要

鸭坦布苏病毒诱导鸭睾丸组织细胞凋亡的实验研究

摘要

鸭坦布苏病毒（DuckTembusuVirus,DTMUV）自2010年在我国东南沿海各

省份爆发后，给养鸭业带来沉重的打击。目前有关DTMUV的研究主要集中在

病原学以及流行病学领域，而DTMUV的致病机制尚不清楚。DTMUV主要危害

鸭生殖系统、神经系统和免疫系统，但DTMUV与雄性生殖的关系研究鲜有报

道。凋亡（Apo