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    1.目的基因分离克隆特点：3’→5’合成，合成长度200bp01过程：推出基因序列后，用DNA合成仪合成02作用：合成引物03一目的基因的化学合成定义：分离纯化出的目的片段用PCR仪扩增（详见主要技术）引物设计原则长度：15-30bp退火温度：二PCR合成目的基因序列：少相似，防错配引物3’末端：避免为A（易错配）CG含量：40%-60%未知序列时：用近缘生物对应片段参考01RT-PCR间接合成：以mRNA为模板逆转录出02cDNA，再以cDNA为模板03PCR04cDNA：05定义：以mRNA为模板逆转录合成的无内含子06单链环状DNA07特点：无内含子、单链环状，逆转录酶属于08DNA聚合酶，需引物三基因文库分离目的基因基因组文库的建立：cDNA文库的建立：基因图位克隆01染色体步移法：02染色体登陆：

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