脱氧雪腐镰刀菌烯醇解毒酶DepA及DepB结构解析及其解毒的分子机制探究.pdf

DepADepB

脱氧雪腐镰刀菌烯醇解毒酶及结构解析及其解毒的分子机制探究

1.材料与方法23

1.1材料23

1.2方法26

2.结果与分析31

2.1重组DepA的表达纯化以及酶学性质研究31

2.2重组DepB的表达纯化36

2.3DepADepB39

重组和降解能力的鉴定

3.讨论41

4.本章小结41

参考文献43

第三章脱氧雪腐镰刀菌烯醇解毒酶DepA和DepB的晶体制备及结构解析45

1.材料与方法45

1.1材料45

1.2方法46

2.结果与分析48

2.1DepA晶体的制备，衍射及解析48

2.2DepB晶体的制备，衍射及解析54

3.讨论61

4.本章小结62

参考文献64

第四章脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱毒酶DepA和DepB解毒的分子机制探究67

1.方法与材料67

1.1材料67

1.2方法67

2.结果与分析71

2.1DepA对DON解毒的分子机制探究71

2.2DepB对3-keto-DON解毒的分子机制探究80

3.讨论84

4.本章小结85

ii

目录

参考文献87

全文结论89

论文创新点91

硕士期间发表文章93

致谢95

iii

表格索引

表格索引

表2-1所用仪器及设备26

表2-2SDS凝胶的配制27

表2-3重组DepA诱导表达后的酶活测定结果32

表2-4重组DepA纯化表33

表2-5金属离子及抑制剂对重组DepA酶活力的影响35

表2-6DepA的底物特异性35

表2-7DepB诱导表达后的酶活测定结果37

表2-8重组DepB纯化表38

表3-1DepA的数据收集和优化统计51

表3-2DepB的数据收集和优化统计58

表4-1DepA设计突变引物68

表4-2DepB设计突变引物70

表4-3PCR体系设置70

表4-4DepA与DON对接的结果统计74

表4-5DepA与葡萄糖对接的结果统计75

表4-6DepA与异丙醇对接的结果统计76

表4-7DepB与3-keto-DON对接的结果统计81

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图形索引

图形索引

图1-1与DON的生物合成相关的TRI族基因簇2

图1-22020年世界范围内真菌毒素的污染情况4

图1-3脱氧雪腐镰刀菌烯醇的生物降解途径5

图1-4脱氧雪腐镰刀菌烯醇的异构化途径以及发挥相关作用的酶8

图1-5四种PQQ依赖型脱氢酶的活性位点入口比较10

图1-6醛-酮还原酶的主体结构以及其催化四联体1