化妆品 抗光老化活性的评价 秀丽线虫法-征求意见稿.docx

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化妆品抗光老化活性的评价秀丽线虫法

1范围

本文件规定了运用秀丽线虫（以下简称线虫）评价化妆品抗光老化活性的术语和定义、检测原理、材料与试剂、实验仪器与设备、实验步骤、实验方法、结果评价、实验有效性的条件与参数限定说明。

本文件适用于化妆品（精华、乳液、膏霜等）的抗光老化活性的功效评价，化妆品原料可参考本方法。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

T/GDCA013—2022化妆品抗氧化活性的评价秀丽线虫法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

光老化Photoaging

光老化是指皮肤由于反复暴露于紫外线，而引起皮肤的结构和功能特征的改变，例如皮肤纹理不均匀、皱纹形成，弹性下降和皮肤色素沉着等。

4检测原理

UVB长期暴露是导致光老化的主要外源性因素之一，UVB辐射能够直接穿透大气并与皮肤中的细胞相互作用，产生大量的自由基和活性氧分子，引起细胞内氧化应激，加速皮肤老化过程。秀丽线虫中的辐射生物效应信号在哺乳动物中非常保守，被广泛应用在UV暴露期间生物系统的生理和分子变化的研究。紫外线照射能明显诱导线虫形态学改变，影响线虫的生长和正常发育，加速线虫死亡使其寿命缩短，线虫在紫外辐照下的存活能力可反映其抗紫外辐射应激的能力。

本方法利用不同化妆品/原料对线虫进行处理，记录其暴露在UVB辐照环境后各组线虫的存活率，从而反映受试样品的抗光老化活性。

5材料与试剂

5.1材料

5.1.1秀丽线虫（以下简称线虫）：N2野生型秀丽线虫（Caenorhabditiselegans，theBridtolstrainN2）购自秀丽线虫遗传学中心。

5.1.260mm培养皿。

5.1.3挑虫器。5.2试剂

除非另有说明，化学试剂使用符合国家标准的分析纯试剂。配制方法见附录A。

氯化钠（NaCl）、硫酸镁（MgSO4）、氯化钙（CaCl2）、氢氧化钠（NaOH）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、磷酸氢二钾（K2HPO4）、磷酸氢二钠十二水（Na2HPO4?12H2O）、技术琼脂粉、LB肉汤、胰蛋白胨、硫酸链霉素、胆固醇、次氯酸钠（NaClO）、无水乙醇、5-氟-2’-脱氧尿嘧啶核苷（FUDR）。

5.3阳性对照品

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茶多酚CAS#84650-60-2。

6实验仪器与设备

6.1连续变倍体视显微镜，物镜变倍范围0.7×~4.5×。6.2震荡培养箱：精度±1℃。

6.3生化培养箱：精度±1℃。

6.4超净工作台。

6.5万分之一天平：精度0.1mg。

6.6高压灭菌锅。

6.7电热恒温水浴锅。

6.8紫外交联仪（配有UVB辐照计）。6.9低速离心机，适配2mL离心管。

7实验步骤

7.1实验准备

繁殖期（3d～5d龄）野生型线虫用于同期化。7.2样品

样品包含化妆品原料及产品。配制样品测试溶液时，首选溶剂是M9缓冲液或无菌水，如需用到有机溶剂助溶，可选用二甲基亚砜（DMSO），溶剂于测试溶液中的浓度要≤2%。针对不同样品，需结合其特性调整前处理方法，具体按T/GDCA013—2022进行实验。

7.3线虫NGM的配制

7.3.1处理组NGM的配制

按T/GDCA013—2022的规定进行实验。

7.3.2阳性对照组NGM的配制

阳性对照茶多酚组：用蒸馏水配制1mg/mL母液，取E.coliOP50菌液和茶多酚母液按95∶5比例混合均匀，用移液枪吸取150μL菌液轻缓地打在每个NGM平板上中央。NGM平板避光晾干后封膜，4℃保存备用。为保证样品活性，样品板限制在一周内使用。

8实验方法

8.1线虫同期化

按T/GDCA013—2022的规定进行实验。8.2预测试

按T/GDCA013—2022的规定进行实验。8.3线虫抗光老化测定

收集繁殖期（3d～5d龄）野生型秀丽线虫用于同期化。线虫同期化后，转移到含/不含药物的NGM上作用3天。收集各组线虫，用M9缓冲液清洗3遍后，转移至不含OP50的NGM上。将带有线虫的NGM板放置在辐照仪UVB灯管正下方，每次一个皿，设置辐照剂量为250mJ/cm2进行紫外辐照。辐照后将各组线虫转移至含FUDR的OP50