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超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素

一、引言

(1)随着现代医学的不断发展，抗生素在治疗各种细菌感染性疾病中发挥着至关重要的作用。然而，抗生素的滥用和不当使用导致细菌耐药性不断增强，给人类健康带来了严重威胁。磺胺、喹诺酮与四环素类抗生素作为常用的抗生素药物，在临床应用中广泛存在。因此，对尿液中这些抗生素的检测显得尤为重要。超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术因其高灵敏度、高特异性和高准确度，已成为抗生素检测的常用方法。

(2)尿液是人体代谢废物的重要排泄途径，检测尿液中的抗生素含量可以反映人体内抗生素的暴露情况。近年来，由于抗生素在动物源食品中的滥用，导致人畜共患病的风险增加，因此对尿液中抗生素的检测不仅对临床用药具有重要的指导意义，也对食品安全和公共卫生具有重要价值。本研究的目的是建立一种基于UHPLC-MS/MS技术的尿液样本中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素的筛查确证方法，以期为临床用药监控、食品安全检测以及公共卫生研究提供技术支持。

(3)目前，国内外已有多篇文献报道了UHPLC-MS/MS技术在抗生素检测中的应用。然而，由于不同抗生素的结构和性质差异较大，建立适用于多种抗生素的检测方法仍具有一定的挑战性。本研究针对磺胺、喹诺酮与四环素类抗生素的特点，优化了样品前处理和色谱分离条件，实现了对这些抗生素的快速、准确检测。同时，通过对质谱条件的优化，提高了检测的特异性和灵敏度，为尿液样本中抗生素的定量分析提供了可靠依据。

二、实验部分

(1)实验材料包括磺胺类、喹诺酮类和四环素类抗生素标准品，乙腈、甲醇、氨水等有机溶剂，以及超高效液相色谱-串联质谱仪（UHPLC-MS/MS）。样品前处理采用液-液萃取法，具体操作如下：取一定量的尿液样品，加入适量乙腈和内标溶液，涡旋混匀后，离心取上清液，重复萃取两次，合并上清液，用氮气吹干，残渣用流动相复溶解，经0.22μm滤膜过滤后待测。

(2)色谱条件采用反相色谱柱，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序如下：初始流动相为乙腈，保持2分钟，然后线性梯度至95%乙腈，保持3分钟，最后恢复初始流动相，整个分析时间为12分钟。流速设置为0.4mL/min，柱温为30℃。质谱条件采用电喷雾离子源（ESI），正负离子扫描模式，扫描范围为m/z100-1200。碰撞能量（CE）和去溶剂温度（TEM）分别设置为25eV和350℃。为提高检测灵敏度，采用多反应监测（MRM）模式，设定磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素的定量离子对。

(3)标准曲线的制作：配制一系列不同浓度的磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素混合标准溶液，在相同色谱条件下进行测定，以峰面积为纵坐标，对应浓度值为横坐标，绘制标准曲线。线性范围和线性相关系数（r2）满足定量分析要求。同时，对尿液样品进行加标回收实验，以验证该方法在实际应用中的准确性和可靠性。

三、结果与分析

(1)本研究建立的UHPLC-MS/MS方法对磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素的检测结果显示，该方法具有较好的线性范围和良好的精密度。在10-1000ng/mL的浓度范围内，磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素的标准曲线线性相关系数（r2）均大于0.995，表明该方法在该浓度范围内具有良好的线性关系。同时，通过重复测定同一浓度样品，其日内精密度和日间精密度均低于10%，表明该方法具有良好的精密度。

(2)在实际样品分析中，本研究对尿液样本进行了加标回收实验，结果显示磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素的回收率在90%-110%之间，相对标准偏差（RSD）小于10%，表明该方法具有良好的准确性和可靠性。此外，通过对实际尿液样本的检测，该方法成功筛查出尿液样本中的磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素，表明该方法在实际应用中具有较高的实用价值。

(3)本研究还比较了该方法与其他检测方法的性能，结果显示，UHPLC-MS/MS方法在灵敏度、特异性和准确度方面均优于其他检测方法。特别是对于微量样品的检测，UHPLC-MS/MS方法具有更高的灵敏度，能够满足实际样品中抗生素残留的检测需求。此外，该方法操作简便、快速，适用于大规模样品的检测，具有广泛的应用前景。

四、结论

(1)本研究成功建立了基于UHPLC-MS/MS技术的尿液样本中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素的筛查确证方法。该方法在10-1000ng/mL的浓度范围内表现出良好的线性关系，线性相关系数（r2）均大于0.995，且日内精密度和日间精密度均低于10%，表明该方法具有高度的准确性和重复性。在加标回收实验中，磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素的回收率在90%-110%之间，RSD小于10%，显示出良好的准确度。

(2)通过对实际尿液样本的检测，该方法成功筛查出尿液样本中的磺胺、喹诺酮和四环素类抗生素，