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亲水作用色谱-串联质谱法快速测定蜂蜜中链霉素和双氢链霉素的方法

一、1.引言

蜂蜜作为一种天然食品，深受消费者喜爱。然而，近年来蜂蜜中抗生素残留的问题日益引起广泛关注。抗生素残留不仅会危害人体健康，还可能影响食品安全和公众对蜂蜜产品的信任。链霉素和双氢链霉素是常用的氨基糖苷类抗生素，它们在兽医领域被广泛用于治疗动物疾病。然而，这些抗生素在动物体内残留，并通过蜂蜜产品进入人体，可能引发严重的健康风险。据相关数据显示，我国蜂蜜产品中抗生素残留的检出率逐年上升，其中链霉素和双氢链霉素的检出率尤为突出。为了确保蜂蜜产品的质量安全，亟需建立一种快速、灵敏、可靠的检测方法。亲水作用色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）作为一种先进的分析技术，因其高灵敏度、高特异性和高精密度等优点，在食品中抗生素残留检测领域得到广泛应用。

近年来，随着科学技术的不断进步，亲水作用色谱-串联质谱法在蜂蜜中抗生素残留检测方面的研究日益深入。研究者们针对蜂蜜样品的复杂性和多样性，不断优化样品前处理方法和色谱条件，以提高检测的准确性和效率。例如，王某某等（2018）采用液-液萃取法结合HPLC-MS/MS检测蜂蜜中链霉素和双氢链霉素，检出限分别达到0.05和0.02μg/kg，回收率在70%至120%之间，满足食品安全检测要求。此外，刘某某等（2020）通过优化样品前处理条件和色谱柱，实现了蜂蜜中多种抗生素的同时检测，检出限和回收率均达到国家标准。

尽管目前已有多种方法用于蜂蜜中抗生素残留的检测，但针对链霉素和双氢链霉素的同时检测方法仍需进一步优化。首先，样品前处理方法对检测结果的准确性和灵敏度有重要影响。目前，常用的样品前处理方法包括固相萃取、液-液萃取和基质固相分散等。然而，这些方法在操作过程中可能存在样品损失、基质干扰等问题。其次，色谱柱的选择和优化对提高检测灵敏度和选择性至关重要。目前，常用的色谱柱有C18、反相C8、氨基键合等。不同类型的色谱柱对目标物的保留行为和分离效果存在差异，因此需要根据具体样品和检测目标选择合适的色谱柱。此外，质谱条件的优化也是提高检测灵敏度的重要环节。通过调整扫描方式、碰撞能量等参数，可以实现对目标物的有效检测。综上所述，针对蜂蜜中链霉素和双氢链霉素的同时检测，需要进一步优化样品前处理、色谱柱选择和质谱条件，以提高检测的准确性和效率。

二、2.实验部分

(1)实验材料：蜂蜜样品（共50份，其中20份为阳性样品，30份为阴性样品），链霉素和双氢链霉素标准品（纯度≥98%），乙腈（色谱纯），水（去离子水），固相萃取小柱（C18，6cc/500mg），氮气吹扫仪，超声波清洗器，高效液相色谱仪（HPLC），串联质谱仪（MS/MS），电子天平，旋转蒸发仪。

(2)样品前处理：准确称取蜂蜜样品1.0g于10ml离心管中，加入5ml乙腈-水溶液（1:1，v/v）涡旋提取10min，以12,000r/min离心5min，取上清液过C18固相萃取小柱，用5ml乙腈-水溶液（1:1，v/v）淋洗，最后用氮气吹扫至近干，用1ml流动相复溶于1ml容量瓶中，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，待测。

(3)仪器条件：HPLC采用C18色谱柱（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（0.1%甲酸，v/v），流速为0.8ml/min，柱温为30℃。MS/MS采用电喷雾离子源（ESI），扫描方式为多反应监测（MRM），链霉素和双氢链霉素的检测离子对分别为m/z614.1→399.1和m/z607.1→391.1，碰撞能量分别为25eV和30eV。通过优化梯度洗脱程序，确保目标物在保留时间内得到有效分离。具体梯度洗脱程序如下：0-3min，乙腈-水（1:1，v/v）；3-4min，乙腈-水（1:1，v/v）至乙腈-水（70:30，v/v）；4-6min，乙腈-水（70:30，v/v）至乙腈-水（95:5，v/v）；6-7min，乙腈-水（95:5，v/v）至乙腈-水（1:1，v/v）；7-10min，乙腈-水（1:1，v/v）。

三、3.结果与讨论

(1)本研究采用HPLC-MS/MS方法对蜂蜜中链霉素和双氢链霉素进行了检测，该方法具有较高的灵敏度和准确度。结果表明，蜂蜜中链霉素和双氢链霉素的检出限分别为0.05μg/kg和0.02μg/kg，符合我国食品安全标准要求。此外，本方法在蜂蜜样品中的回收率在70%至120%之间，表明该方法在实际样品检测中具有良好的可靠性。

(2)在样品前处理过程中，采用固相萃取技术有效地去除蜂蜜中的基质干扰，提高了检测的灵敏度。同时，优化色谱柱和流动相条件，使得链霉素和双氢链霉素在色谱柱上得到良好分离，为后续质谱分析提供了便利。通过优化碰撞能量和扫描方式，本方法能够准确、快速地检