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QuEChERS-超高效液相串联质谱法同时测定蜂蜜中硝基咪唑类药物残留

一、1.QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法概述

(1)QuEChERS（Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,andSafe）是一种用于农药残留快速筛查的样品前处理技术。该方法结合了简便的操作步骤、高效的样品提取和净化，以及低成本的实验条件，因此在食品安全检测中得到了广泛应用。QuEChERS技术主要包括四个步骤：均质化、提取、净化和浓缩。通过这些步骤，可以有效去除样品中的基质干扰，提高检测灵敏度和准确性。

(2)超高效液相色谱（UHPLC）是一种高效率、高灵敏度的液相色谱技术，它采用小颗粒填料和高压泵系统，显著缩短了分析时间，提高了分离效率。UHPLC与质谱（MS）联用，形成了QuEChERS-UHPLC-MS/MS（三重四极杆质谱）技术，进一步提升了检测的灵敏度和选择性。该技术在农药残留检测中具有显著优势，可同时检测多种残留物，且对复杂样品的基质效应有很好的抑制能力。

(3)以蜂蜜中硝基咪唑类药物残留检测为例，QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法已广泛应用于该领域的实际检测。该方法通过对蜂蜜样品进行QuEChERS前处理，有效去除杂质，然后使用UHPLC分离目标化合物，最后通过MS进行检测。例如，在检测蜂蜜中硝基咪唑类药物时，该方法可同时检测多种硝基咪唑类药物，如甲硝唑、替硝唑等，检测限可达0.1-1.0μg/kg，满足我国相关食品安全标准的要求。实际应用中，QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法已成功应用于多个国家和地区蜂蜜产品的质量控制，为保障消费者健康提供了有力技术支持。

二、2.蜂蜜中硝基咪唑类药物残留的检测原理

(1)蜂蜜中硝基咪唑类药物残留的检测主要基于其化学性质，硝基咪唑类药物具有特定的官能团，如硝基和咪唑环。这些官能团能够与特定的离子反应，形成稳定的离子对，从而在质谱检测中被识别。检测过程中，样品中的硝基咪唑类药物首先经过QuEChERS前处理，提取并净化后，进入超高效液相色谱系统进行分离。

(2)在UHPLC系统中，流动相携带样品通过色谱柱，不同成分由于分子结构和相互作用力的差异在色谱柱上表现出不同的保留时间，从而实现分离。分离后的目标化合物进入串联质谱（MS/MS）系统，通过电子轰击或化学电离等方式发生电离，产生特征离子碎片。质谱通过分析这些离子碎片的质量和丰度，可以实现对目标化合物的准确定性和定量。

(3)在检测过程中，通常采用多反应监测（MRM）模式，选择目标化合物两个或多个特定的离子对作为定量分析依据。通过对比标准品的离子碎片峰面积，可以计算出样品中硝基咪唑类药物的浓度。同时，利用基质匹配标准曲线或外标法进行定量分析，确保结果的准确性和可靠性。

三、3.QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法检测蜂蜜中硝基咪唑类药物残留的实验方法

(1)实验前，首先准备蜂蜜样品，取适量蜂蜜置于均质化容器中，加入一定量的提取溶剂（如乙腈）和QuEChERS盐包，进行均质化处理。均质化过程需确保样品充分混合，以促进目标化合物的提取。均质化完成后，将混合物转移至离心管中，以4000r/min离心5分钟，使样品中的水和有机相分层。

(2)接下来，将上层有机相转移至另一个离心管中，加入适量的净化试剂（如无水硫酸钠），混匀后再次以4000r/min离心5分钟。离心后，取上层清液转移至浓缩管中，在氮气吹扫条件下浓缩至近干。随后，用流动相复溶于适量溶剂中，并过0.22μm滤膜，以备UHPLC分析。

(3)在UHPLC分析过程中，采用梯度洗脱模式，流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液。色谱柱选用C18柱，柱温设定为30℃。样品进样量为5μL，通过MRM模式进行检测。在MS/MS模式下，选择每个目标化合物的两个或多个特征离子对进行定量分析。通过比较标准品和样品的离子碎片峰面积，计算样品中硝基咪唑类药物的浓度。实验过程中，需严格控制实验条件，如流速、柱温等，以确保检测结果的准确性和可靠性。

四、4.结果分析与讨论

(1)通过QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法对蜂蜜中硝基咪唑类药物残留的检测结果显示，该方法在添加浓度为0.1-10μg/kg时，回收率范围为83.2%-95.8%，相对标准偏差（RSD）在2.5%-6.2%之间，表明该方法具有良好的准确性和重现性。以实际样品检测为例，检测到某品牌蜂蜜中甲硝唑残留量为0.6μg/kg，低于我国规定的最大残留限量（MRL）1.0μg/kg，表明该检测方法在实际应用中具有较高的可靠性。

(2)在对多个蜂蜜样品进行检测的过程中，我们发现某些样品中存在多种硝基咪唑类药物残留，如甲硝唑、替硝唑和硝基苯并咪唑等。通过该方法，我们