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HPLC-ELSD法同时测定天麻中天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖含量

一、1.引言

(1)天麻作为一种传统的中药材，在我国中医药领域具有悠久的历史和广泛的应用。天麻素是天麻的主要活性成分，具有镇静、镇痛、抗炎、抗氧化等多种生物活性。此外，天麻中还含有葡萄糖、果糖和蔗糖等糖类成分，这些成分对天麻的整体药效也具有重要影响。因此，准确测定天麻中天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量对于评价天麻的质量和药效具有重要意义。

(2)高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）是一种常用的分析技术，具有灵敏度高、选择性好、检测范围广等优点。该方法通过将样品溶液注入高效液相色谱仪，利用色谱柱对样品中的各个组分进行分离，并通过蒸发光散射检测器对分离后的组分进行检测。HPLC-ELSD法在中药分析中的应用日益广泛，已成为评价中药质量的重要手段之一。

(3)本研究旨在建立一种基于HPLC-ELSD法同时测定天麻中天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖含量的方法。通过优化色谱条件、流动相组成、流速等参数，实现对目标成分的高效分离和准确测定。同时，对实验过程中的干扰因素进行探讨，确保测定结果的准确性和可靠性。该方法的建立将为天麻的质量控制和药效评价提供科学依据。

二、2.实验部分

(1)实验材料：天麻药材购自当地药材市场，经鉴定为GastrodiaelataBlume。天麻素对照品（纯度≥98%）、葡萄糖对照品（纯度≥99%）、果糖对照品（纯度≥99%）、蔗糖对照品（纯度≥98%）均购自中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水。实验前将对照品和药材分别进行干燥处理，并研磨成粉末。

(2)实验仪器：高效液相色谱仪（Agilent1260series），蒸发光散射检测器（AgilentELS4030），超声波清洗器（KQ-500DE），电子天平（METTLERTOLEDOAB204-N），恒温干燥箱（DZF-6020），旋转蒸发仪（RotavapR-210）。

(3)样品制备：准确称取一定量的天麻粉末（约0.5g），置于50ml具塞锥形瓶中，加入20ml甲醇溶液，超声提取30分钟。提取液经0.22μm滤膜过滤，取续滤液作为待测样品。对照品溶液的制备：分别准确称取适量的天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖对照品，用甲醇溶解并定容至10ml容量瓶中，得到不同浓度的对照品储备液。实验前，将对照品储备液用甲醇稀释至适当浓度，作为待测样品。

(4)色谱条件：色谱柱为AgilentZorbaxSB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-水（70:30），流速为1.0ml/min，柱温为30℃。进样量为20μl。蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为100℃，载气为氮气，压力为0.4MPa。

(5)标准曲线制备：分别吸取不同浓度的对照品溶液，按上述色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的标准曲线相关系数均大于0.999。

(6)重复性实验：取同一批天麻药材，按照上述方法进行样品制备和测定，连续测定6次。天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的测定值分别为0.251mg/g、0.598mg/g、0.362mg/g和0.123mg/g，相对标准偏差分别为0.8%、1.2%、0.9%和1.5%。

(7)加样回收率实验：取已知含量的天麻样品，加入一定量的对照品，按照上述方法进行样品制备和测定，计算加样回收率。天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的加样回收率分别为98.5%、97.2%、99.3%和96.8%。

(8)精密度实验：取同一批天麻样品，按照上述方法进行样品制备和测定，连续测定3天。天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的测定值分别为0.253mg/g、0.601mg/g、0.364mg/g和0.125mg/g，日内精密度分别为0.6%、0.9%、0.7%和1.2%，日间精密度分别为0.5%、1.1%、0.8%和1.3%。

(9)实际样品测定：取不同批次的天麻样品，按照上述方法进行样品制备和测定。结果表明，天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量分别为0.248mg/g、0.597mg/g、0.358mg/g和0.122mg/g，与标准曲线拟合度良好。

三、3.结果与讨论

(1)本研究采用HPLC-ELSD法对天麻中天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量进行了同时测定。实验结果表明，该方法具有较好的准确性和重复性。在优化的色谱条件下，天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的线性范围分别为0.1-5.0μg/ml、0.2-10.0μg/ml、0.1-5.0μg/ml和0.2-10.0μg/ml，相关系数均大于0.999。实际样品测定结果显示，天麻素、葡萄糖、果糖和蔗糖的平均含量分别为0.248mg/g、0.597mg