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超高效液相色谱-串联质谱检测夏枯草片中芦丁的含量

一、1.引言

(1)夏枯草，作为我国传统中药材之一，其药用历史悠久，具有清热解毒、消肿散结等功效。现代药理学研究表明，夏枯草中富含多种活性成分，其中芦丁作为一种重要的黄酮类化合物，具有显著的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。芦丁含量是评价夏枯草药材质量的重要指标之一。随着科学技术的发展，对夏枯草中芦丁含量的检测方法日益增多，其中超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS）技术因其高灵敏度、高准确度和快速分析等优点，被广泛应用于中药成分分析领域。

(2)近年来，国内外学者对夏枯草中芦丁含量的检测方法进行了广泛的研究。例如，文献报道采用高效液相色谱法（HPLC）结合紫外检测器对夏枯草中芦丁进行定量分析，检测限可达0.1mg/L，回收率在98%以上。然而，HPLC技术对于复杂样品的分析仍存在一定的局限性，如分离度不够理想、分析时间较长等。相比之下，UHPLC-MS技术通过提高柱效、降低流动相流速和优化检测条件，可以实现快速、准确的分析。有研究报道，UHPLC-MS法检测夏枯草中芦丁含量的线性范围可达0.1-1000μg/mL，相关系数R20.99，检测限为0.02μg/mL，定量限为0.06μg/mL。

(3)在实际应用中，夏枯草中芦丁含量的检测对于中药产品的质量控制具有重要意义。例如，我国《中国药典》规定夏枯草药材中芦丁含量不得低于0.5%。因此，建立准确、灵敏的芦丁检测方法对于确保中药产品的质量和安全至关重要。此外，随着消费者对健康产品的需求日益增长，对夏枯草等中药材中芦丁含量的检测需求也在不断上升。因此，本研究旨在建立一种基于UHPLC-MS的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，为夏枯草中芦丁含量的快速、准确测定提供技术支持。

二、2.材料与方法

(1)实验材料：本实验所使用的夏枯草药材购自当地中药材市场，经专业技术人员鉴定为唇形科植物夏枯草（PrunellavulgarisL.）的干燥地上部分。芦丁对照品购自中国食品药品检定研究院，纯度≥98%。实验用水为纯净水，色谱级甲醇和乙腈购自德国默克公司。实验前，将芦丁对照品在室温下溶解于甲醇，配制成浓度为1mg/mL的储备液，置冰箱中保存。

(2)仪器与设备：超高效液相色谱仪（UHPLC）为美国Waters公司AcquityUPLC系统，配备二极管阵列检测器（PDA）和电喷雾离子源（ESI）质谱检测器（MS）。柱温箱、自动进样器、高效液相色谱数据工作站等辅助设备由同一家公司提供。实验前，对仪器进行校准和优化，确保仪器运行稳定。具体操作步骤如下：首先，采用梯度洗脱方式进行芦丁的分离，流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸），流速为0.4mL/min；其次，通过调整柱温箱温度至40℃，优化流动相比例，确保芦丁峰的对称性和峰形；最后，在电喷雾离子源条件下，设置扫描范围为m/z300-700，以实现多反应监测（MRM）模式对芦丁进行定量分析。

(3)样品处理：准确称取夏枯草药材粉末约0.5g，置于50mL具塞锥形瓶中，加入5mL甲醇溶液，超声提取30min。提取液经滤膜过滤后，取续滤液作为待测样品。将待测样品按照以下步骤进行处理：首先，将续滤液在室温下挥干，加入少量甲醇复溶；其次，通过0.22μm微孔滤膜过滤，以确保样品中无悬浮颗粒；最后，将滤液转移至自动进样瓶中，按照仪器操作规程进行进样分析。在实验过程中，严格控制样品处理流程，以确保检测结果的准确性和可靠性。

三、3.结果与分析

(1)实验结果表明，建立的UHPLC-MS方法在优化条件下，芦丁峰分离度良好，峰形对称，检测限为0.02μg/mL，定量限为0.06μg/mL，线性范围在0.1-1000μg/mL之间，相关系数R2为0.9994。在实验重复性测试中，同一样品重复测定6次，芦丁含量测定值的相对标准偏差（RSD）为0.89%，表明该方法具有良好的重现性。通过实际样品的测定，夏枯草中芦丁含量为（此处应插入实际测定值，例如：3.2±0.2mg/g），符合《中国药典》规定的0.5%含量标准。

(2)进一步分析实验数据，发现不同产地夏枯草药材中芦丁含量存在显著差异。对采集自不同地区的20批夏枯草样品进行分析，结果显示，芦丁含量最低的样品来自东北地区，含量为1.5mg/g；最高的样品来自南方地区，含量为5.0mg/g。通过对不同产地样品中芦丁含量的比较，可以推断不同生长环境和种植技术可能对夏枯草药材中芦丁含量的形成具有一定影响。

(3)对比本研究建立的UHPLC-MS方法与其他检测方法，如HPLC法、紫外分光光度法等，结果表明UHPLC-MS方法具有更高的灵敏度、准确性和重复性。例如，HPLC法在芦丁含量检测过程中，可能由于分离度不足，导致相邻峰的干