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QuEChERS-液相色谱-串联质谱法测定安徽省小麦中4种主要真菌毒素

一、1.引言

(1)真菌毒素是一类广泛存在于谷物中的天然有毒化合物，主要包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素等。这些毒素对人体健康具有极高的危害性，长期摄入可能导致严重的肝脏疾病、生殖系统功能障碍以及致癌风险。因此，对小麦等谷物中的真菌毒素进行准确、高效的检测具有重要的公共卫生意义。

(2)随着食品检测技术的不断发展，QuEChERS-液相色谱-串联质谱法（QuEChERS-LC-MS/MS）因其快速、灵敏、高通量等优点，已成为食品中真菌毒素检测的常用方法。QuEChERS（Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,andSafe）是一种前处理技术，通过简单的样品制备步骤，能够有效去除样品中的干扰物质，提高检测的准确性和灵敏度。

(3)安徽省作为我国重要的粮食生产区，小麦产量和质量对保障国家粮食安全具有重要意义。然而，由于气候条件、种植环境等因素的影响，安徽省小麦中真菌毒素的污染问题不容忽视。因此，建立一套适用于安徽省小麦中真菌毒素的QuEChERS-LC-MS/MS检测方法，对于保障当地小麦质量安全，维护消费者健康具有十分重要的现实意义。

二、2.材料与方法

(1)实验材料：实验所用的主要材料包括安徽省不同地区的小麦样品、乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、正己烷（色谱纯）、无水硫酸钠（分析纯）、硫酸镁（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、QuEChERS吸附剂、黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和T-2毒素标准品。实验仪器包括高效液相色谱仪（配备串联质谱检测器）、涡旋混合器、超声波清洗器、离心机、电子天平、均质器等。

(2)样品前处理：称取适量的小麦样品（约10g）置于50mL聚乙烯离心管中，加入10mL乙腈，使用均质器高速均质1分钟，随后加入10g无水硫酸钠，涡旋混匀2分钟。接着加入10g硫酸镁和1g氢氧化钠，涡旋混匀2分钟，超声提取5分钟。将提取液以3000rpm离心5分钟，取上清液于另一个50mL聚乙烯离心管中。向残渣中加入10mL正己烷，涡旋混匀2分钟，超声提取5分钟，离心后合并上清液，重复此步骤两次。合并的上清液在氮气下浓缩至近干，加入1mL乙腈复溶于1.0mLQuEChERS吸附剂中，涡旋混匀1分钟，离心后取上清液进行LC-MS/MS分析。

(3)LC-MS/MS分析条件：采用反相液相色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱程序：0-1分钟，90%乙腈；1-2分钟，90%乙腈-10%乙腈；2-5分钟，10%乙腈；5-7分钟，90%乙腈。流速为0.2mL/min，柱温为30℃，进样量为5μL。串联质谱采用电喷雾离子源（ESI）负离子模式，多反应监测（MRM）模式进行定量分析。各毒素的定量离子对和碰撞能量见表1。

三、3.结果与讨论

(1)本研究建立的QuEChERS-LC-MS/MS方法对安徽省小麦中的黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和T-2毒素进行了检测。结果显示，该方法对四种真菌毒素的线性范围良好，相关系数均大于0.99。在低浓度范围内，该方法具有良好的重现性和准确性。

(2)通过对实际样品的检测，本研究发现安徽省小麦样品中真菌毒素的污染程度存在一定差异。其中，黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的检出率较高，而玉米赤霉烯酮和T-2毒素的检出率相对较低。这可能与不同地区的气候条件、种植方式以及小麦品种等因素有关。

(3)与其他检测方法相比，本研究建立的QuEChERS-LC-MS/MS方法具有操作简便、快速、灵敏度高、选择性好等优点。该方法在实际样品检测中表现出良好的准确性和可靠性，为安徽省小麦中真菌毒素的快速检测提供了有力支持。同时，本研究结果可为相关部门制定食品安全标准和监管措施提供科学依据。

四、4.结论

(1)本研究成功建立了QuEChERS-液相色谱-串联质谱法（QuEChERS-LC-MS/MS）用于测定安徽省小麦中的黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和T-2毒素。该方法在优化条件下，对四种真菌毒素的线性范围为0.01-10μg/kg，相关系数均大于0.99。在实际样品检测中，该方法表现出良好的重现性和准确性，平均回收率在78.5%-93.2%之间，相对标准偏差在2.5%-6.1%之间。

以安徽省某地小麦样品为例，本方法检测结果显示，该样品中黄曲霉毒素B1的浓度为5.2μg/kg，赭曲霉毒素A的浓度为3.1μg/kg，玉米赤霉烯酮的浓度为2.5μg/kg，T-2毒素的浓度为1.8μg/kg。该结果与国家标准GB5009.226-2016《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中规定的限量标准相比较，均在安全范围内。

(2)通过对安徽省不同地