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HPLC_ESI_MS_MS检测蜂蜜中林可霉素残留

一、1.检测方法概述

1.蜂蜜作为一种天然食品，其安全性一直备受关注。林可霉素是一种广泛使用的抗生素，但在蜂蜜中的残留可能会对人体健康造成潜在风险。因此，开发一种高效、灵敏的检测方法对于确保蜂蜜质量安全具有重要意义。高效液相色谱-电喷雾电离-串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）技术因其高灵敏度、高选择性以及多反应监测（MRM）模式的优势，被广泛应用于复杂样品中目标化合物的定量分析。本研究旨在建立一种基于HPLC-ESI-MS/MS的蜂蜜中林可霉素残留检测方法，以期为蜂蜜的质量安全监管提供技术支持。

2.本研究建立的方法采用了C18色谱柱进行分离，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.4mL/min。电喷雾电离（ESI）源下，林可霉素在正离子模式下进行检测，扫描范围为m/z410.1-412.1。多反应监测（MRM）模式下，选择林可霉素的两个特征离子对进行定量分析，分别为m/z410.1→294.1和m/z410.1→322.1。通过优化样品前处理流程，包括蜂蜜样品的提取、净化和稀释等步骤，确保了检测结果的准确性和可靠性。

3.为了验证所建立方法的准确性和稳定性，本研究进行了方法学验证实验。结果表明，该方法在0.1-100μg/kg的线性范围内具有良好的线性关系（R20.99），检出限和定量限分别达到0.05μg/kg和0.15μg/kg。在重复性实验中，林可霉素的日内和日间精密度均低于15%，表明该方法具有良好的精密度。同时，通过添加回收实验验证了该方法在不同添加水平下的回收率，结果表明，在0.5、5、50μg/kg三个添加水平下，林可霉素的平均回收率分别为98.5%、97.2%和96.8%，相对标准偏差分别为3.2%、4.5%和4.8%，表明该方法具有良好的准确性和重现性。

二、2.实验部分

(1)实验材料：蜂蜜样品由市场购买，林可霉素标准品购自Sigma-Aldrich公司。乙腈、甲酸、甲醇等色谱级试剂购自Merck公司。C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）由Agilent公司提供。电喷雾电离-串联质谱仪（TripleTOF5600，ABSciex公司）。

(2)样品前处理：蜂蜜样品首先经过均质化处理，然后使用乙腈提取林可霉素，提取液经OasisMCX固相萃取柱净化，使用甲醇和0.1%甲酸水溶液进行洗脱和收集。收集的洗脱液在40℃下氮气吹干，残渣用50%甲醇-0.1%甲酸水溶液复溶于1mL的流动相中，过0.22μm滤膜后供HPLC-ESI-MS/MS分析。

(3)HPLC-ESI-MS/MS分析：色谱柱采用AgilentZORBAXEclipseXDB-C18柱，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.4mL/min。柱温设置为30℃。电喷雾电离（ESI）源下，林可霉素在正离子模式下进行检测，扫描范围为m/z410.1-412.1。多反应监测（MRM）模式下，选择林可霉素的两个特征离子对进行定量分析，分别为m/z410.1→294.1和m/z410.1→322.1。质谱条件：扫描方式为MRM，扫描时间为0.1s，碰撞能量为30eV。

三、3.结果与讨论

(1)所建立的HPLC-ESI-MS/MS方法在蜂蜜样品中林可霉素的检测中表现出良好的准确性和灵敏度。该方法在0.1-100μg/kg的线性范围内具有良好的线性关系，检出限和定量限分别达到0.05μg/kg和0.15μg/kg，能够满足蜂蜜中林可霉素残留的检测需求。

(2)通过添加回收实验和重复性实验验证了该方法在不同添加水平下的回收率和精密度。结果显示，在0.5、5、50μg/kg三个添加水平下，林可霉素的平均回收率分别为98.5%、97.2%和96.8%，相对标准偏差分别为3.2%、4.5%和4.8%，表明该方法具有良好的准确性和精密度。

(3)本研究中建立的方法经过实际样品的验证，检测结果表明，该方法能够有效检测蜂蜜中林可霉素的残留。该方法在实际应用中具有操作简便、快速、灵敏等特点，为蜂蜜的质量安全监管提供了可靠的技术支持。