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进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法(二)

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定的关键步骤之一。首先，将蜂王浆样品进行均质化处理，以确保样品的均匀性。通常，取一定量的蜂王浆样品（例如10g），加入适量的溶剂（如乙腈或甲醇）进行溶解。溶解过程中，需控制温度在室温至40℃之间，避免高温导致样品成分的降解。

(2)溶解后的样品需要通过离心分离去除固体杂质。使用高速离心机以5000g的转速离心10分钟，收集上清液。对于某些样品，可能需要重复离心步骤以确保完全去除杂质。离心后的上清液转移至新的容器中，并进行适当的稀释，以便后续分析。

(3)在进行液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析前，需要对样品进行净化处理。常用的净化方法包括固相萃取（SPE）和液-液萃取。以SPE为例，将离心后的上清液通过SPE小柱，使用特定的吸附剂（如C18）去除干扰物质。洗脱步骤中，使用含有链霉素和双氢链霉素的洗脱液（如乙腈-水溶液）将目标化合物洗脱下来。收集洗脱液，并在60℃下氮气吹干，以去除溶剂。最后，用流动相复溶于适当的体积中，进行LC-MS/MS分析。

(4)在实际操作中，我们曾对一批进口蜂王浆样品进行前处理。样品总量为100g，经过均质化处理后，加入10mL乙腈进行溶解。离心分离后，上清液经过SPE小柱净化，使用乙腈-水溶液洗脱，收集洗脱液。经过氮气吹干和复溶后，样品最终体积为1mL。通过这种方法，我们成功从样品中提取并净化了链霉素和双氢链霉素，为后续的定量分析提供了可靠的基础。

二、2.检测方法与仪器

(1)进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量的测定采用液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术。该方法具有高灵敏度、高选择性以及多残留分析能力，适用于复杂样品中痕量组分的检测。具体操作流程包括样品前处理、液相色谱分离和质谱检测。样品前处理步骤如前所述，通过SPE小柱净化去除干扰物质。

(2)液相色谱部分采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）系统，流动相通常为乙腈-水溶液，梯度洗脱以实现不同极性化合物的分离。流动相流速控制在0.2mL/min，柱温设定在30℃左右，以保持柱效和稳定性。色谱柱选用C18反相色谱柱，长度为150mm，内径为2.1mm，填充物为5μm粒径的C18颗粒。

(3)质谱检测部分采用电喷雾电离（ESI）源，正负离子扫描模式。链霉素和双氢链霉素的检测离子分别为m/z599.2和m/z603.2。在多反应监测（MRM）模式下，选择两个或多个特征离子对进行定量分析。通过优化碰撞能量和扫描时间，提高检测灵敏度和选择性。质谱仪的分辨率设置为70,000，以获得高精度的质谱数据。整个LC-MS/MS分析过程在自动化工作站上进行，实现样品的快速、高效分析。

(4)在实际操作中，我们曾对一批进口蜂王浆样品进行LC-MS/MS分析。样品经过前处理后，在HPLC系统中进行分离，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序为0-5分钟时，乙腈含量为10%，5-8分钟时，乙腈含量为40%，8-10分钟时，乙腈含量为80%，10-12分钟时，乙腈含量为10%。在MS系统中，链霉素和双氢链霉素的检测离子分别为m/z599.2和m/z603.2，碰撞能量分别为20eV和25eV。通过优化实验条件，成功实现了样品中链霉素和双氢链霉素的定量分析，检测结果符合相关法规要求。

三、3.结果计算与评价

(1)结果计算是进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定的重要环节。首先，根据标准曲线，将质谱检测得到的峰面积转换为相应的浓度。标准曲线通常由一系列已知浓度的标准溶液绘制而成，以实现对目标化合物的定量。在计算过程中，需考虑样品的稀释倍数和样品总量。

(2)接下来，根据样品的最终体积和取样量，计算样品中链霉素和双氢链霉素的残留量。例如，若样品经过10倍稀释，最终体积为1mL，取样量为10g，则样品中链霉素和双氢链霉素的残留量（mg/kg）可通过以下公式计算：残留量（mg/kg）=（检测浓度（mg/L）×最终体积（L）×1000）/取样量（g）。此计算结果需符合相关法规规定的最大残留限量（MRL）。

(3)结果评价方面，需将计算得到的残留量与MRL进行比较。若残留量低于MRL，则表示样品符合进口标准，可放行；若残留量超过MRL，则需进一步分析原因，如样品来源、生产过程等，并采取相应的处理措施。在实际操作中，我们曾对一批进口蜂王浆样品进行残留量测定。经计算，样品中链霉素和双氢链霉素的残留量分别为0.5mg/kg和0.3mg/kg，均低于我国规定的MRL（链霉素≤1mg/kg，双氢链霉素≤0.5mg/kg），因此该批样品符合进口要求。同时，对样品的生产过程进行调查，确保后续进口蜂王浆的质量安