化妆品 抗热老化活性的评价 秀丽线虫法-征求意见稿.docx

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化妆品抗热老化活性的评价秀丽线虫法

1范围

本文件规定了运用秀丽线虫（以下简称线虫）评价化妆品抗热老化活性的术语和定义、检测原理、材料与试剂、实验仪器与设备、实验步骤、实验方法、结果评价与实验有效性的条件。

本文件适用于化妆品（精华、乳液、膏霜等）的抗热老化活性的功效评价，化妆品原料可参考本方法。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

T/GDCA013—2022化妆品抗氧化活性的评价秀丽线虫法T/GDCA033—2023化妆品抗羰基化活性的评价秀丽线虫法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

热老化Antithermalagingactivity

热老化是指由于内部和外部产生的热量致使皮肤温度升高，从而导致皮肤加速老化。在高温刺激下，基质金属蛋白酶过度降解细胞基质，造成胶原蛋白和弹性蛋白变性，降低皮肤弹性，增加皱纹。

3.2

热休克蛋白HeatShockProteins

热休克蛋白（HSPs）是内质网应激反应因子，作为一种压力应激蛋白在热应激过程中起着重要的作用。当机体受到高温等恶劣环境袭击时，就会被大量合成，从而维持细胞正常的生理活动，清除变性损伤蛋白，对衰老引起的一系列病理改变起到了保护作用。

4检测原理

HSP-16.2蛋白是分子量为16kd的小分子热休克蛋白（sHSPs），能赋予细胞以耐热性抵抗高温，并且可以作为分子伴侣以防止蛋白聚集，从而调节细胞的生存和死亡的平衡。当线虫处于热激环境下会诱导HSP16.2表达，HSP16.2被用作是热应激研究的经典标志物。线虫生存适宜温度为20℃,活性物质可通过调控热应激蛋白HSP16.2提高线虫在35℃环境下的抗热应激能力。本文件运用TJ375转基因虫株（含绿色荧光蛋白报告基因（GFP）偶联的hsp16.2启动子，具有与HSP16.2相同的表达模式），测定化妆品/原料对35℃热激后的线虫荧光强度变化，体现其抗热老化功效。

5材料与试剂

5.1材料

5.1.1线虫株：TJ375(gpIs1[hsp-16.2p::GFP])品系线虫由福建上源生物科技有限公司赠与。

5.1.260mm培养皿。

5.1.3挑虫器。5.2试剂

5.2.1除非另有说明，化学试剂使用符合国家标准的分析纯试剂。

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5.2.2培养基与试剂配制按T/GDCA033—2023的规定进行实验。

5.2.3氯化钠（NaCl）、硫酸镁（MgSO4）、氯化钙（CaCl2）、氢氧化钠（NaOH）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、磷酸氢二钾（K2HPO4）、磷酸氢二钠十二水（Na2HPO4?12H2O）、技术琼脂粉、LB肉汤、胰蛋白胨、硫酸

链霉素、胆固醇、次氯酸钠（NaClO）、无水乙醇、二甲基亚砜、左旋咪唑、琼脂糖、PBS（1×)。5.3阳性对照品

虾青素PubChemCID：2246。

6实验仪器与设备

按T/GDCA013—2022的规定进行。

7实验步骤

7.1实验准备

繁殖期（3d～5d龄）TJ375线虫用于同期化。

线虫基本操作方法按T/GDCA033—2023的规定进行。7.2样品

样品包含化妆品原料及产品。配制样品测试溶液时，首选溶剂是M9缓冲液或无菌水，如需用到有机溶剂助溶，可选用二甲基亚砜（DMSO），溶剂于测试溶液中的浓度要≤2%。针对不同样品，需结合其特性调整前处理方法，具体按T/GDCA013—2022进行实验。

7.3线虫NGM的配制

7.3.1处理组NGM的配制

按T/GDCA013—2022的规定进行实验。

7.3.2阳性对照组NGM的配制

称取0.001g虾青素于2mL离心管中，加入558μL二甲基亚砜。将离心管超声30min后置于80℃水浴锅中加热30s至完全溶解，现配现用，全程避光。

取E.coliOP50菌液和虾青素母液按98:2比例混合均匀，用移液枪吸取150μL菌液轻缓地打在每个NGM平板上中央。NGM平板避光晾干后封膜，4℃保存备用。为保证样品活性，各样品板限制在一周内使用。

8实验方法

8.1线虫同期化

按T/GDCA013—2022的规定进行实验。8.2预测试

按T/GDCA013—2022的规定进行实验。8.3线虫抗热老