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UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法测定盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的含量

一、1.引言

(1)随着现代医药工业的快速发展，药物的质量和安全问题日益受到关注。盐酸二甲双胍作为一种常用的降糖药物，在临床上广泛应用于治疗2型糖尿病。然而，在盐酸二甲双胍的生产和使用过程中，可能会产生一些遗传毒性杂质，这些杂质的存在可能对患者的健康产生潜在风险。因此，准确测定盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的含量对于保障药物的安全性和有效性具有重要意义。

(2)遗传毒性杂质是指那些能够在生物体内引起基因突变或染色体畸变的化学物质。这些杂质可能来源于原料、中间体、溶剂或生产过程中的污染。目前，常用的检测方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等。其中，UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法因其高灵敏度、高分辨率和强大的检测能力，在复杂样品分析中得到了广泛应用。

(3)本研究旨在建立一种基于UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法的测定方法，用于盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的含量测定。该方法通过优化色谱条件、质谱参数以及样品前处理过程，实现了对多种遗传毒性杂质的准确测定。此外，本研究还对方法的线性范围、精密度、准确度等进行了详细评价，确保了该方法在实际应用中的可靠性和实用性。

二、2.实验材料与方法

(1)实验所用仪器包括UHPLC-Q-OrbitrapHRMS系统、高效液相色谱仪、质谱仪、自动进样器、涡旋混合器、超声波清洗器等。样品前处理过程中，盐酸二甲双胍及其片剂样品分别用适当的溶剂溶解，并通过适当的过滤和稀释步骤进行预处理。

(2)UHPLC-Q-OrbitrapHRMS分析条件如下：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序根据待测杂质的性质进行优化。流速为0.4mL/min，柱温为30°C。质谱条件包括：扫描方式为正离子扫描，扫描范围为m/z100-1500，分辨率设置为70,000，自动增益控制（AGC）设置为1e6，扫描时间为0.1秒。

(3)样品前处理方法如下：准确称取一定量的盐酸二甲双胍及其片剂样品，加入适量的溶剂溶解，涡旋混合均匀后，通过0.22μm滤膜过滤。取适量滤液，通过适当稀释后进行UHPLC-Q-OrbitrapHRMS分析。同时，配制标准溶液，用于建立标准曲线和进行定量分析。实验过程中，对空白溶剂、样品和标准溶液进行重复测定，以评估方法的准确度和精密度。

三、3.结果与分析

(1)通过优化UHPLC-Q-OrbitrapHRMS条件，成功实现了盐酸二甲双胍及其片剂中多种遗传毒性杂质的分离和检测。在优化的色谱条件下，待测杂质与主成分峰得到良好分离，峰形尖锐，峰面积稳定。质谱分析结果显示，待测杂质的特征离子得到有效检测，定量准确。

(2)对该方法进行了线性范围、精密度和准确度等实验性能评估。结果表明，该方法在0.1-100μg/mL的线性范围内具有良好的线性关系，相关系数R2均大于0.99。在低、中、高三个浓度水平下，样品的日内精密度和日间精密度均小于10%，表明该方法具有良好的精密度。同时，通过添加已知量的标准品到空白样品中，计算得到该方法的高、中、低三个浓度水平的回收率分别为93.2%、96.5%、94.8%，表明该方法具有较高的准确度。

(3)通过对实际样品的测定，该方法成功检测到盐酸二甲双胍及其片剂中的多种遗传毒性杂质。结果显示，样品中遗传毒性杂质的含量均在法定限量范围内，表明该方法能够满足实际样品检测的需求。此外，与传统的检测方法相比，UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法具有更高的灵敏度和更宽的线性范围，为盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的检测提供了更加可靠和高效的手段。

四、4.讨论与结论

(1)本研究建立的UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法在盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的检测方面表现出优异的性能。与传统的检测方法相比，该方法具有更高的灵敏度和分辨率，能够有效分离和检测多种复杂基质中的杂质。这一结果表明，UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法在药物杂质分析中具有广泛的应用前景。

(2)在实际样品分析中，本方法表现出良好的准确度和精密度，能够满足实际检测需求。通过优化色谱和质谱条件，提高了检测灵敏度，使得低含量杂质也能够被准确检测。此外，本方法对样品前处理的要求较低，简化了实验操作，有助于提高检测效率。

(3)本研究的结论是，UHPLC-Q-OrbitrapHRMS法是一种快速、准确、高效的盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的检测方法。该方法为药物质量控制提供了有力的技术支持，有助于提高药物的安全性和有效性。未来，可以进一步探索该方法在其他药物杂质分析中的应用，为