TEM型β内酰胺酶新亚型TEM-166编码基因的克隆表达.docxVIP

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2025-01-22 发布于河南
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TEM型β内酰胺酶新亚型TEM-166编码基因的克隆表达.docx

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TEM型β内酰胺酶新亚型TEM-166编码基因的克隆表达

一、实验材料与试剂

(1)实验材料主要包括TEM-166编码基因的克隆载体pET28a、大肠杆菌菌株BL21(DE3)、质粒提取试剂盒、DNA连接酶、TaqDNA聚合酶、限制性内切酶、DNA胶回收试剂盒、质粒电转化试剂盒等。TEM-166编码基因来源于某细菌的基因组DNA，经过PCR扩增、克隆、测序验证后，确认为TEM-166基因。克隆载体pET28a是一种常用的表达载体，其含有T7启动子、His标签、终止子等元件，适用于表达融合蛋白。大肠杆菌菌株BL21(DE3)是一种常用的工程菌，具有较高的表达效率，且对IPTG诱导表达有良好的响应。质粒提取试剂盒用于提取大肠杆菌中的质粒DNA，TaqDNA聚合酶用于PCR扩增，限制性内切酶用于切割DNA片段，DNA胶回收试剂盒用于回收目的基因片段，质粒电转化试剂盒用于将目的基因导入大肠杆菌中。

(2)实验试剂包括IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）、Tris-HCl缓冲液、SDS电泳缓冲液、考马斯亮蓝R-250染色液、蛋白质Marker、丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、NaOH、HCl等。IPTG是一种常用的诱导剂，可以激活T7启动子，启动TEM-166编码基因的表达。Tris-HCl缓冲液用于调节细胞培养和PCR反应的pH值，SDS电泳缓冲液用于进行蛋白质的分离和检测，考马斯亮蓝R-250染色液用于检测蛋白质条带，蛋白质Marker用于确定蛋白质分子量，丙烯酰胺和N,N-亚甲基双丙烯酰胺是合成聚丙烯酰胺凝胶的原料，NaOH和HCl用于制备电泳缓冲液。

(3)实验中使用的化学试剂包括NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、MgCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、EDTA·2Na、DTT（二硫苏糖醇）、DTT-Na2、DTT-HCl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-Na、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-NaOH、DTT-Cl、DTT-