靖江香沙芋种芋脱毒快繁技术规程.docxVIP

PAGE

PAGE1

DB32/T××××—2018

PAGE2

靖江香沙芋种芋脱毒快繁技术规程

2024-**-**发布

2024-**-**实施

DB3212

泰州市地方标准

泰州市地方标准

前言

本标准由泰州市农业农村局提出。

本标准由泰州市市场监督管理局归口并监督。

本标准起草单位：靖江市香沙芋产销协会、靖江市农业农村局、江苏省农科院。

本标准主要起草人：羊雪萍、赵燕、张小平、吴婧煜、殷剑美、闻晨晨、陆海兵、刘尘

靖江香沙芋种芋脱毒快繁技术规程

1范围

本标准对靖江香沙芋脱毒组培苗培育、脱毒种芋繁殖体系的大田管理和种芋采收、预处理、贮存等采后环节的质量控制技术进行了规定。

本标准适用于靖江香沙芋的脱毒种芋繁殖工作。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本部分。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本部分。

NY/T391绿色食品产地环境质量

GB/T8321农药合理使用准则

NY/T496肥料合理使用准则通则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1脱毒原原种芋

用组织培养方法对芋头进行脱毒，获得无病毒组培苗后，在防虫条件下种植获得的种芋。

3.2脱毒原种芋

由脱毒原原种芋在防虫条件下种植获得的种芋。

3.3脱毒种芋

由脱毒原种芋在符合条件产地种植获得的种芋。

4生产基础条件要求

4.1环境要求

符合NY/T391中所规定。

4.2生产主体要求

符合《中华人民共和国种子法》和《农作物种子生产经营许可管理办法》规定的经营主体。

4.3脱毒组培苗扩繁基地要求

组培室组成包括准备室、接种室、培养室。培养室规模应与脱毒核心种芋繁殖圃面积相匹配，按照每万株脱毒组培苗20m2建设。脱毒种芋按照“三级扩繁”体系建设，脱毒原原种芋繁殖圃、脱毒原种芋繁殖田、脱毒种芋繁殖田面积比为1：12：140。

4.4脱毒原原种芋繁殖基地要求

4.4.1繁殖基地经营主体要求

需在专业化种芋生产单位进行，应具有防虫网棚内种植条件，由专业技术人员负责田间管理和去杂除劣操作等。

4.4.2防虫网棚建设

防虫网选用40目～60目优质尼龙纱网，棚内空间大（棚高2m以上，宽6m～8m），结构稳定，利于田间作业，具有较强的抗风性。

4.4.3繁殖田块要求

靠近水源，排灌方便；选择土层深厚、土壤肥沃的偏沙性壤土；未种植芋头及甘薯、马铃薯、山药等地下根茎类作物1年以上；田间灌排沟系配套，水利设施齐全，达到“旱能灌，涝能排”。

4.5脱毒原种芋繁殖基地要求

4.5.1繁殖基地经营主体要求

同本标准4.4.1。

4.5.2防虫网棚建设

同本标准4.4.2。

4.5.3繁殖田块要求

同本标准4.4.3。

4.6脱毒种芋繁殖基地要求

4.6.1繁殖基地经营主体要求

同本标准4.2。

4.6.2繁殖田块要求

同本标准4.4.3。

5靖江香沙芋脱毒组培苗培育

5.1外植体培养和处理

以靖江香沙芋种芋萌发的顶芽为外植体。选取保存完好、无病斑的芋头，经质量比0.2%的高锰酸钾（KMnO4）灭菌处理5min，用灭菌后的细沙覆盖整个芋头的2/3处，放置于光照培养箱中促其萌发。当芽生长到1cm～2cm时切取茎尖，剥除茎尖外层2层～3层叶片，流水冲洗10min，在超净工作台上用75%酒精浸泡30s，用3%次氯酸钠（NaClO）溶液消毒10min～15min，无菌水漂洗5次～7次。剥离茎尖外层叶鞘，在解剖镜下剥取0.4mm～0.8mm大小茎尖作为外植体。

5.2组培苗芽

将剥取的外植体接种在MS+2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）2.0mg/L的培养基中，在温度25±2oC、光照强度2200Lux左右的培养室内无菌培养50d～60d，诱导形成分化出芽。

5.3脱毒处理

组培芽苗在温度40±2oC、光照强度2200Lux左右的培养室内无菌培养条件下再经3d左右培养。

5.4病毒鉴定

将组培苗芽切下，接种在MS+噻苯隆（TDZ）1.0mg/L的培养基中，长到两叶以上时（20d左右），取部分叶片利用酶联免疫分析（ELISA）法进行芋头花叶病毒（DMV）的检测。保留无病毒组培苗进行继代培养。

5.5继代培养

将无病毒组培苗继续培养。当植株萌发出的不定芽达2.0cm时，切下不定芽接种在MS+TDZ1.0mg/L的培养基中进行继代培养。一般连续继代培养不超过2次。

5.6诱导生根

将高≥2.0cm、带有2片叶的健壮小苗分开，转入含0.2‰活性炭的MS+萘乙酸（N