《抗体制备过程》课件.pptVIP

*****************抗体简介特异性识别抗体是一种由免疫系统产生的蛋白质，可以特异性识别和结合特定的抗原。免疫防御抗体在机体免疫防御中发挥着重要的作用，可以中和病毒、细菌等病原体，保护机体免受感染。生物制药抗体在生物制药领域应用广泛，例如单克隆抗体药物用于治疗癌症、自身免疫性疾病等。抗体结构与功能Y形结构抗体由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，呈Y形结构。抗原结合位点抗体通过其可变区与抗原结合，每个抗体具有独特的抗原结合位点。中和作用抗体通过与抗原结合，阻断抗原与细胞的结合，从而发挥中和作用。抗体的分类按结构分类主要分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类。不同类型抗体的结构差异主要体现在重链和轻链的类型以及糖基化程度的不同。按来源分类可分为多克隆抗体和单克隆抗体。多克隆抗体由多种免疫细胞产生，而单克隆抗体则由单个B细胞克隆产生，具有高度的特异性和均一性。按功能分类可分为中和抗体、沉淀抗体、凝集抗体、补体结合抗体等。不同的功能抗体在免疫反应中扮演着不同的角色，共同发挥免疫防御功能。单克隆抗体制备的意义1高特异性单克隆抗体具有高度特异性，能够识别并结合特定的抗原，不会与其他抗原发生交叉反应。2高纯度单克隆抗体由单个B细胞克隆产生，确保了抗体的均一性，提高了抗体的纯度。3高产量单克隆抗体可以进行体外大量培养，可以稳定地生产大量的抗体，满足临床和科研需求。4广泛应用单克隆抗体在疾病诊断、治疗、药物研发、生物工程等领域具有广泛的应用前景。单克隆抗体制备的方法概述免疫动物首先，需要选择合适的免疫动物，如小鼠、大鼠或兔子，进行免疫。选择免疫动物时，应考虑抗原的类型和动物的免疫反应能力。融合杂交瘤细胞免疫后，从免疫动物中获得免疫脾细胞，并与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞可以无限增殖，并分泌特异性抗体。筛选克隆通过筛选技术，选择出分泌所需单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆，并进行扩增。抗体生产扩增后的杂交瘤细胞可以进行大规模培养，以生产大量的单克隆抗体。纯化抗体最后，需要对单克隆抗体进行纯化，以获得纯度和活性高的单克隆抗体。免疫小鼠1选择免疫原选择与目标抗原相似的抗原2免疫程序按照特定时间间隔和剂量给小鼠注射免疫原3免疫效果检测通过血清抗体滴度检测免疫效果4免疫小鼠筛选筛选高滴度、特异性强的免疫小鼠免疫小鼠是单克隆抗体制备的关键步骤，其质量直接影响单克隆抗体的质量。脾细胞的融合1细胞融合将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞混合，利用聚乙二醇（PEG）等融合剂促进细胞融合。2杂交瘤细胞融合后形成的细胞称为杂交瘤细胞，这些细胞既具有脾细胞产生特异性抗体的能力，又具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性。3培养筛选在选择性培养基中培养杂交瘤细胞，筛选出能够产生所需抗体的杂交瘤细胞克隆。阳性克隆的筛选1ELISA检测单克隆抗体2免疫荧光染色观察细胞表达抗体3克隆化挑取阳性克隆筛选阳性克隆是单克隆抗体制备的关键步骤。该步骤通过不同的方法，例如ELISA检测和免疫荧光染色，识别出能分泌目标抗体的细胞克隆，并将其分离、扩增和培养，最终获得稳定的高产单克隆抗体细胞系。阳性克隆的扩增选择培养基选择合适的培养基，提供细胞生长所需的营养和环境条件，例如，通常使用含血清的培养基，以提供生长因子和激素。无菌操作在无菌环境下进行操作，防止微生物污染，影响克隆的纯度和稳定性。培养条件控制控制培养温度、pH值、氧气浓度等参数，保持细胞的最佳生长状态。定期检测定期检测细胞的生长情况，如细胞密度、活力等，确保细胞的正常增殖。克隆保存定期冻存克隆细胞，以备不时之需，确保克隆的稳定性和可重复性。阳性克隆的稳定性验证经过筛选后，需要对阳性克隆进行稳定性验证，以确保其能够长期稳定地表达抗体。1稳定性验证2亚克隆进行亚克隆，以获得更稳定、更纯的克隆。3传代培养进行长期传代培养，观察抗体表达水平是否稳定。4抗体测定定期测定抗体表达量和活性，以评估稳定性。稳定性验证非常重要，能够保证最终获得稳定的单克隆抗体。高产克隆的培养1选择培养基选择合适的培养基，以保证克隆细胞的生长和抗体产量。2优化培养条件优化培养条件，例如温度、pH值、氧气浓度，以提高抗体产量。3扩大培养规模采用合适的生物反应器，扩大培养规模，以满足抗体生产需求。4收集抗体在合适的时机，收集培养液，并进行下一步的纯化操作。高产克隆的培养是单克隆抗体制备的关键步骤之一。培养过程中需要选择合适的培养基，优化培养条件，并扩大培养规模，以最大限度地提高抗体