浅论幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备.docxVIP

下载本文档

0
0
约9.57千字
约 19页
2025-01-22 发布于江西
举报
版权申诉

浅论幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备.docx

此“医疗卫生”领域文档为创作者个人分享资料，不作为权威性指导和指引，仅供参考

1、本文档共19页，可阅读全部内容。
2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

浅论幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

【摘要】目的：构建表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,)NCTC11637IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体，分析其抗原性并制备抗体。方法：应用PCR技术从基因组扩增cagM基因片段,TA克隆后测序分析，并构建表达载体pET28a(+)cagM,转化BL21，IPTG诱导表达，SDSPAGE及鉴定表达蛋白，表达蛋白以Ni2+NTA柱进行纯化，用软件分析其抗原性后，免疫家兔制备多克隆抗体，ELISA检测多克隆抗体效价。结果：测序结果表明cagM基因全长1131bp(基因库登录号为GU269568)，编码376个氨基酸，与基因库中已知菌株J99，26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%；诱导表达后经SDSPAGE检测表明，在43700处发现一条新生条带，Ni2+NTA柱纯化后为单一条带，软件分析表明其抗原性较强，免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶×105。结论:首次成功克隆并表达了pNCTC11637cagM基因，并制备了其抗体，为以后进一步研究其生物学功能以及相关疾病的检测与治疗奠定了基础。

【关键词】幽门螺杆菌；Ⅳ型分泌系统；cagM基因；抗体

CloningandexpressioncagMgeneofHelicobacterpyloritypeⅣsecretionsystemandantibodypreparation

TIANShuwei,SHAOShihe,HANJun,HUANGHe,HUANGShiteng

(InstituteforLifeSciences;DepartmentofMicrobiology,SchoolofMedicalScienceandLaboratoryMedicine,JiangsuUniversity,ZhenjiangJiangsu212013,China)

［Abstract］Objective:ToconstructprokaryoticexpressionvectorforexpressingcagM(HP0537)ofHelicobacterpylori()NCTC11637ofⅣtypesecretionsystem,toanalyzeitsantigenicityandtoproduceantibodies.Methods：PCRtechnologywasusedtoamplifycagMfromthegenome.ThenTAcloningwasusedforsequenceanalysis.WeconstructedexpressionvectorpET28a(+)cagM,andtransformedittoBL21.IPTGwasusedtoinduceexpression.AfterSDSPAGEforidentificationofexpressedproteinandNi2+NTAcolumnforpurification,usedsoftwareanalysisofitsantigenicity,andpreparedantibodybyimmunizationofrabbits.Atlast,ELISAwasusedtodetectpolyclonalantibodytiters.Results:cagMgenesequencingresultsshowedthatthefulllengthwas1131bp(GenBankaccessionnumber:GU269568),encoding376aminoacids.ComparedwithstrainsJ99,26695andG27,itsaminoacidhomologywas98%～99%.AftertheinducedexpressionandSDSPAGEanalysis,inthe43700positionfoundanewband,andNi2+NTAcolumnpurifiedwasasingleband.Thesoftwareanalysisshowedthattheanti