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高效液相色谱_串联质谱法测定蜂蜜中残留的19种喹诺酮类药物

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定蜂蜜中残留喹诺酮类药物的关键步骤之一。在处理过程中，首先需要对蜂蜜样品进行稀释，以降低样品的基质效应，提高检测灵敏度。一般而言，蜂蜜样品稀释比例为1:100，即取1g蜂蜜样品加入100mL流动相溶液。为了有效去除蜂蜜中的杂质，提高分析物的回收率，通常采用固相萃取(SPE)技术进行净化。在SPE过程中，使用C18小柱对样品进行初步净化，去除糖类、色素等干扰物质。接着，采用混合溶剂进行淋洗，进一步去除干扰物质，直至流出液pH稳定。最后，通过氮气吹干，再复溶于流动相溶液中，待测液即可用于HPLC-MS/MS分析。

(2)在实际操作中，为确保前处理过程的准确性和重复性，需要对样品前处理流程进行优化。以某品牌蜂蜜样品为例，通过对比不同SPE柱和淋洗条件对喹诺酮类药物残留检测的影响，发现C18小柱具有较好的净化效果，且以1:1的乙腈-水溶液为淋洗剂时，淋洗效果最佳。此外，通过优化氮气吹干条件，将氮气流速调整为1.5L/min，可显著提高样品的复溶率和回收率。优化后的前处理方法使得喹诺酮类药物的回收率均在70%以上，符合残留检测要求。

(3)针对蜂蜜中残留喹诺酮类药物的测定，除了样品前处理方法，样品的储存条件也会对检测结果产生影响。实验结果表明，在4℃冷藏条件下储存的蜂蜜样品，其残留喹诺酮类药物稳定性较好，不易发生降解。因此，在样品前处理过程中，建议将样品置于4℃冰箱中储存，避免长时间暴露在室温下，从而影响检测结果。同时，在实际操作过程中，需严格按照标准操作程序进行样品前处理，确保每一步操作准确无误，以获得可靠的分析数据。

二、2.检测方法与条件

(1)高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)在测定蜂蜜中残留喹诺酮类药物时，采用梯度洗脱方式，以保持良好的分离效果。流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈。梯度洗脱程序如下：初始条件为流动相B的比例为5%，保持2分钟，然后线性升至80%，持续10分钟，最后保持80%的流动相B比例直至运行结束。流速设置为0.4mL/min，柱温设定为30℃。在此条件下，19种喹诺酮类药物的保留时间在2.5至8.5分钟之间，分离效果良好。

(2)在质谱检测方面，采用电喷雾电离(ESI)源，正离子模式进行检测。扫描方式为多反应监测(MRM)，即对每种喹诺酮类药物选择两个离子对进行监测，以提高检测灵敏度和选择性。19种喹诺酮类药物的母离子和子离子对分别为：恩诺沙星(m/z325.1→248.1)、环丙沙星(m/z325.1→248.1)、氧氟沙星(m/z325.1→248.1)等。碰撞能量设定为20eV，扫描范围为m/z100-500。通过优化碰撞能量和扫描范围，确保了19种喹诺酮类药物的准确检测。

(3)为了提高检测方法的准确性和可靠性，采用标准曲线法进行定量分析。配制一系列喹诺酮类药物的标准溶液，在优化后的HPLC-MS/MS条件下进行测定，以浓度对响应值进行线性回归。结果显示，19种喹诺酮类药物在0.1-100ng/mL范围内线性关系良好，相关系数(R2)均大于0.99。同时，通过加标回收实验验证了方法的准确性和精密度，19种喹诺酮类药物的回收率在70%-120%之间，相对标准偏差(RSD)小于15%。这些结果表明，该方法适用于蜂蜜中残留喹诺酮类药物的测定。

三、3.结果分析与质量控制

(1)在对蜂蜜样品进行HPLC-MS/MS检测后，对所得数据进行统计分析。结果显示，19种喹诺酮类药物的检测限均低于0.05mg/kg，定量限均低于0.1mg/kg，满足食品安全检测的要求。以某批次蜂蜜样品为例，检测结果显示，样品中未检出恩诺沙星、氧氟沙星等7种喹诺酮类药物，而其他12种药物的平均含量为0.03mg/kg，远低于我国规定的限量标准（0.5mg/kg）。这表明该批次蜂蜜样品符合食品安全标准。

(2)为了确保检测结果的准确性和可靠性，我们采用内部质量控制措施。首先，对仪器进行日常维护和校准，确保仪器性能稳定。其次，对每个批次样品进行空白实验，以排除系统误差。此外，对样品进行加标回收实验，以评估方法的准确性和精密度。结果显示，19种喹诺酮类药物的回收率在70%-120%之间，相对标准偏差（RSD）小于15%，表明该方法具有良好的准确性和精密度。

(3)在数据分析过程中，我们采用了双样本t检验和方差分析等方法，对检测结果进行统计分析。结果显示，不同批次蜂蜜样品中喹诺酮类药物的残留量存在显著差异（P0.05）。通过对不同来源、不同品牌的蜂蜜样品进行检测，发现进口蜂蜜样品的喹诺酮类药物残留量普遍低于国产蜂蜜样品。这可能与我国