细菌基本检验技术.ppt

实验一

细菌检验基本技术(三)1掌握细菌和基本形态和特殊结构。32掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的制备。掌握观察菌落的方法，了解细菌在液体、半固体培养基的生长表现及意义。目的【器材】显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等细菌染色标本的制作程序涂片干燥固定染色芽胞染色法（sporestain）革兰染色法（Gramstain）染色方法革兰染色法（Gramstain）”初染：结晶紫＋等量NaHCO33～5s，水洗1脱色：丙酮酒精3～5s，水洗3媒染：碱性碘液3～5s，水洗2复染：碱性稀释复红3～5s，水洗4方法（改良快速法）结果紫色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌芽胞染色法（sporestain）方法：涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染3～5min→水洗→0.5%沙黄1min→水洗、晾干、油镜检结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。12染色关键：脱色时间的长短其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液革兰阳性菌——金黄色葡萄球菌ATCC25923革兰阴性菌——大肠埃希菌ATCC25922影响因素质量控制三、拉丝试验原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。方法：结果：有丝出现（拉丝试验＋）——革兰阴性菌无丝出现（拉丝试验－）——革兰阳性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌