一种幽门螺杆菌感染诊断检测样品的制备装置及检测样品的制备方法.docxVIP

PAGE

1-

一种幽门螺杆菌感染诊断检测样品的制备装置及检测样品的制备方法

一、1.幽门螺杆菌感染诊断检测样品的制备装置

(1)幽门螺杆菌感染诊断检测样品的制备装置主要包括采样器、样本储存容器、离心机、加热设备以及检测仪器等。采样器用于采集患者的胃黏膜样本，要求具备无菌操作功能，确保样本在采集过程中不受外界污染。样本储存容器需具备良好的密封性能，能够防止样本在储存过程中因温度变化而变质。离心机用于分离样本中的细菌，其转速和时长需根据样本量和实验要求进行调整。加热设备主要用于对样本进行适当处理，如高温消毒等，以提高检测的准确性。检测仪器则包括分子生物学检测设备，如实时荧光定量PCR仪等，用于对提取的DNA进行定量分析。

(2)在制备幽门螺杆菌感染诊断检测样品时，采样器的选择至关重要。理想的采样器应具有便捷的操作性、稳定的采样效果和良好的耐受性。常用的采样器有胃镜活检钳、组织采样针和胃黏膜刷等。胃镜活检钳适用于胃镜检查时采集较大的组织样本，组织采样针则适用于采集较小的组织样本，而胃黏膜刷则适用于采集胃黏膜表面的细菌。不同采样器适用于不同情况，根据实际需求和样本采集目的进行选择。

(3)样本制备过程中的消毒和灭菌处理是确保检测结果准确性的关键环节。在采样前，采样器和样本储存容器需经过严格的消毒处理，常用的消毒剂包括70%乙醇、过氧化氢等。消毒后的采样器和容器需在无菌条件下操作，以防止样本在采集过程中被污染。在样本处理过程中，如需进行细菌分离和培养，应采用无菌操作技术，避免交叉污染。此外，检测仪器在使用前也应进行必要的消毒和保养，以保证检测结果的可靠性。

二、2.检测样品的制备方法

(1)检测样品的制备方法首先从采集胃黏膜样本开始。通常采用胃镜活检钳采集，样本量约为1-2克。采集后的样本需立即置于含有适量生理盐水的无菌容器中，以保持样本的活性。随后，将样本在室温下保存不超过2小时，若无法在短时间内进行后续处理，应将样本置于4℃冰箱中保存。为防止样本在运输过程中的污染，样本需使用密封袋包装，并记录样本采集时间、患者信息和样本类型。

(2)在样本处理阶段，首先对样本进行清洗和消毒。将样本置于含有0.9%生理盐水的离心管中，用低速离心机（3000rpm，10分钟）进行离心，去除上清液。接着，用无菌生理盐水洗涤沉淀物，重复洗涤两次，以去除非目标物质。洗涤后的样本再次进行离心，弃去上清液，留取沉淀物。将沉淀物用无菌生理盐水重悬，调整至适当浓度，以备后续DNA提取。

(3)DNA提取是检测样品制备过程中的关键步骤。采用商业化的DNA提取试剂盒，按照说明书进行操作。具体步骤如下：将重悬后的样本加入提取试剂盒中的缓冲液，加入蛋白酶K，混匀，在55℃水浴中孵育30分钟，以破坏细胞壁和细胞膜，释放DNA。随后，加入无RNA酶的DNase处理样本，去除RNA污染，再进行离心分离。弃去上清液，加入无盐乙醇沉淀DNA，再次离心。弃去上清液，用75%乙醇洗涤DNA沉淀，离心后干燥DNA。最后，将干燥的DNA溶解于适量无菌水中，得到用于后续PCR扩增的DNA模板。在实际操作中，通过实时荧光定量PCR技术检测幽门螺杆菌DNA的拷贝数，根据标准曲线计算样品中幽门螺杆菌的浓度。例如，在一项针对我国某地区居民的幽门螺杆菌感染率调查中，使用该方法检测到幽门螺杆菌的平均浓度为1.5×10^4拷贝/μl，与临床症状和病理检查结果具有良好的相关性。

三、3.样品制备的注意事项

(1)样品制备过程中，严格的无菌操作是保证检测结果准确性的基础。从样本采集到处理的每一个环节，都必须遵守无菌操作规范。特别是对于采集胃黏膜样本时，应确保胃镜活检钳的灭菌处理，避免在采样过程中引入外源性微生物。在操作过程中，实验人员需穿戴无菌手套和口罩，避免手部及呼吸道细菌的污染。

(2)样本保存条件对检测结果的准确性同样重要。采集后的样本应在2小时内完成后续处理，如不能及时处理，应将样本置于4℃冰箱中保存，避免高温导致的样本降解。在样本运输过程中，应使用密封袋包装，并确保样品处于低温环境。此外，样本的标识和记录也是不容忽视的环节，准确的样本信息有助于后续数据分析和管理。

(3)DNA提取过程中，应注意避免RNA的污染。在提取DNA前，应先进行RNA的去除，确保DNA提取的纯度。提取过程中，使用无RNA酶的试剂和器具，防止RNA酶的活性破坏DNA。在处理样本时，避免反复冻融，以免对DNA造成损伤。提取后的DNA需经过定量分析，确保其浓度和纯度符合后续PCR扩增的要求。在PCR扩增过程中，应严格控制反应条件，如引物设计、反应体系配置和循环次数等，以保证扩增结果的准确性和稳定性。