无菌检查法—氯化钠注射液无菌检查法（药品生物检定）.pptx

氯化钠注射液的无菌检查法;无菌检查法的定义:

无菌检查法是指用于检查《药典》要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

符合规定的意义:

仅表明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。;（一）实训目的

（二）原理及应用

（三）仪器与试剂

（四）操作步骤

（五）实训报告

（六）注意事项

（七）思考与讨论;（一）实训目的;1.试验原理：

无菌检查法是利用无菌操作的方法，将被检查的药品分别加入适合需氧菌、厌氧菌和真菌生长的液体培养基中，置于适宜温度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断药品是否合格。;2.操作流程及方法：

培养基的制备、培养基的适用性检查、稀释液和冲洗液的制备、方法验证试验、取样、供试品无菌检查。供试品无菌检查的方法有薄膜过滤法和直接接种法两种。只要供试品性状允许，应优先采用封闭式薄膜过滤法，也可用一般薄膜过滤器。;哪些药物需要进行无菌检查？;注射剂（水针、粉针、油乳注射剂）

眼用及非注射产品（手术、烧伤、严重创伤面给药制剂）

可吸收的止血剂

无菌封装的原料药

医疗器具和医用材料;4.无菌检查的环境要求;1.菌种

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC(B)26003〕

铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）〔CMCC(B)10104〕

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕

生孢梭菌（Clostridiumsporogenes）〔CMCC(B)64941〕

白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC(F)98001〕

黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC(F)98003〕

均为国家药品检定机构分发的标准菌种;2.培养基;

需氧菌和厌氧菌培养基：硫乙醇酸盐流体培养基30～35℃（32℃左右）

红色氧化层（h＜深度的1/5）

100℃水浴加热10分钟以除去氧化层，加热时间不超过20分钟。

真菌培养基：改良马丁培养基

23～28℃（25℃左右）

;沸水浴

加热10min;3.供试品

氯化钠注射液（250ml）

4.稀释液及冲洗液

稀释液：0.1%蛋白胨水溶液（PH7.1）（如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤）或pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

冲洗液：聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液（非水溶液制剂供试品的冲洗）

溶剂：十四烷酸异丙酯（膏剂和粘性油剂的溶剂，膜滤除菌）;5.仪器及用具;薄膜过滤仪;2024/12/2;2024/12/2;2024/12/2;（2）培养基接种

取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。;（3）结果判断

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。;生孢梭菌

64901;2.方法验证

（1）菌种及菌液制备

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭茵、白色念珠茵、黑曲霉同培养基灵敏度检查。;（2）薄膜过滤法

无菌操作法取规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内，另取一份同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为阳性对照；如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其分成3等份，分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。置规定温度（细菌30～35℃，真菌23～28℃）培养3～5天，观察结果。

（3）结果判定：

与阳性对照比较，含供试品的各容器细菌均生长良好，则供试品在该检验量和检验条件下无抑菌作用或可忽略不计，供试品可按该法进行无菌检查。

;3.供试品无菌检查

检验量（接种量）：是指一次试验所用的供试品总量。

检验数量：根据供试品的情况，确定检样数量

批出厂or上市抽检；

固体制剂or液体制剂；

直接接种法or薄膜过滤法

参考《药典》附录90-91页表1，表2，表3;液体制剂最少检验用量及上市抽验样品的最少检验数量;4.操作方法;5.培养和观察;6.实验结果判定;（五）实训报告;结论：