2.2.1 动物细胞培养（解析版）.docx

第二章细胞工程

第2节第1课时动物细胞培养

（课前+课中+课后，三案一体）

课前案

【预习新知】

一、动物细胞培养的条件

1.地位：动物细胞培养是动物细胞工程的基础。

2.条件

（1）营养条件：一般使用液体培养基，含有的成分主要有糖类、氨基酸、无机盐和维生素等，另外需要加入血清等一些天然成分。

（2）无菌、无毒的环境

①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌条件下进行操作。

②定期更换培养液，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成伤害。

（3）温度、pH和渗透压：哺乳动物细胞培养的温度多以（36+0.5）℃为宜；多数动物细胞生存的适宜pH为7.2—7.4。

（4）气体环境：所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的作用是维持培养液的pH。在进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养皿，并将它们置于含有95%和5%的CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。

3.过程

二、干细胞培养及其应用

1.干细胞的种类、来源和特征

2.应用：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、器官的发育、再生和修复等密切相关，因而在医学上有着广泛的应用。

【预习自测】

1.制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理。（X）

2.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞。（X）

3.动物细胞培养技术的原理是动物细胞的全能性。（X）

4.胚胎干细胞的分化诱导因子的作用下可以向不同类型的组织细胞分化。（√）

第1课时动物细胞培养课中案

【导】

在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且会产生免疫排斥反应。

1.怎样获得大量的自体健康皮肤？

2.能不能用自体皮肤的单个细胞培养可供的移植皮肤？

【思】

1.动物细胞培养需要哪些基本条件？

2.动物细胞培养的基本操作过程是什么？

3.怎样客观分析干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险？

【议】

1.动物细胞培养需要哪些条件？

营养物质：糖类氨基酸无机盐维生素

无菌、无毒的环境

适宜的温度、pH和渗透压

适宜的气体环境

2.动物细胞培养的过程中，取什么样的组织？

选动物胚胎或幼龄动物的器官或组织

原因：其细胞生命力旺盛，分化程度低，分裂能力强。

3.为什么要分散成单个细胞？如何分散？

分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代谢废物，利于继续培养。

方法：机械法、胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）等处理

①说明动物细胞间的物质主要是什么成分？

蛋白质

②用胃蛋白酶可以吗？

不可以，因为胃蛋白酶的最适PH为1.5左右

③胰蛋白酶不会把细胞消化吗？

酶的作用时间过长，也会破坏细胞结构

4.为什么要将动物组织块分散成单个细胞，制成细胞悬液？

成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞生长和增殖。

5.什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？

①细胞贴壁：某些细胞需要贴附于某些基质表面才能增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上。

②接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。

6.什么是原代培养和传代培养？

①原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。

②传代培养：分瓶后的细胞培养。

7.为什么要分瓶培养？怎样处理？

8.胚胎干细胞的来源是什么？为什么可以分化为动物体内任何一种组织？

①来源：早期胚胎②原因：胚胎干细胞具有发育的全能性

【展】学生展示讨论结果

【评】

1.植物组织培养和动物细胞培养的比较

2.胚胎干细胞和成体干细胞的比较

【检】引导学生总结本节课内容

【练】完成课后案

第1课时动物细胞培养课后案

1．研究人员从动物体内取出正常结肠组织和结肠瘤，经酶处理后制成单细胞悬浮液，然后分瓶并在适宜的相同条件下进行培养。在上述培养过程中均会发生的现象是（）

A．细胞因接触抑制而失去分裂能力

B．细胞出现贴壁生长现象

C．部分细胞核型发生改变并逐渐凋亡

D．细胞增殖并只能形成一层细胞

【答案】B

【分析】在动物细胞培养过程中，首先出现细胞贴壁现象，随着培养瓶中细胞数目的增多，正常细胞会出现接触抑制。

【详解】A、在动物细胞培养过程中，首先出现细胞贴壁现象，随着培养瓶中细胞数目的增多，正常细胞会出现接触抑制，癌细胞不会出现接触抑制或接触抑制弱，但细胞仍可分裂，A错误；

B、在动物细胞培养过程中，首先都会出现细胞贴壁现象，B正确；

C、在培养过程中，多数正常细胞会失去分裂能力而出现凋亡，少数细胞因核型发生改变而获得不死性，癌细胞具有无限分裂能力，不会凋亡，C错误；

D、在细胞培养过程中，癌细胞增殖可形成多层细胞，正常细胞因接触抑制而形成单层细胞，D错误。