第3章 基因工程（单元知识清单）（填空版）.docx

第三章基因工程知识清单

第1节重组DNA技术的基本工具

一、重组DNA技术的基本工具

1.基因工程的概念

别名

技术

操作环境

生物体外

操作对象

操作水平

水平

结果

创造出更符合人们需要的新的和

2.基因工程的诞生和发展

(1)肺炎链球菌转化实验不仅证明DNA是遗传物质，还证明了DNA可在同种生物不同个体之间。

(2)DNA双螺旋结构的提出和的证明。

(3)中心法则的确立。

(4)的破译。

(5)基因转移载体和的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。

(6)体外重组的实现。

(7)重组DNA表达实验的成功。

(8)DNA测序和合成技术的发明。

(9)技术的发明。

(10)技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。

3.重组DNA技术的基本工具

(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)—“分子手术刀”

来源

种类

特点（专一性）

作用

结果

主要来

自

分离的限制酶有种

1.识别双链DNA分子的

2.使每一条连中特定部位的磷酸二酯键断开

断开两个核苷酸之间的

产生和平末端

●已知限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓AATTC和CCC↓GGG，在图中写出两种限制酶切割DNA后产生的末端并写出末端的种类。

EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶识别的不同，切割位点(填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有。

(2)DNA连接酶—“分子缝合针”

①作用：

能够将DNA片段连接起来。

②分类：

基因工程常用的有两种：

●E.coliDNA连接酶：连接互补的，不能连接平末端。

●T4DNA连接酶：连接互补的。

(3)载体——“分子运输车”

①基因工程通常利用作为载体将基因送入细胞。是独立于细胞核或拟核DNA之外，具有自我复制能力的。

●质粒DNA分子上有，可供外源基因插入其中。

●携带外援DNA片段的质粒进入受体细胞后，能够在细胞中进行，或整合到受体DNA上，随受体DNA的同步复制。

质粒上常有特殊的，如抗性基因，便于。

②基因工程常用的载体除质粒外，还有等。

二、DNA的粗提取与鉴定和DNA片段的扩增与电泳鉴定

1.DNA的粗提取与鉴定实验原理

(1)不溶于酒精，溶于酒精。

(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于溶液。

(3)在一定温度下，DNA遇试剂会呈现蓝色。

2．PCR实验原理

PCR利用了和的原理。

3.DNA片段电泳鉴定的原理

DNA分子具有，在一定的下，这些基团可以带上，在电场的作用下，这些带电分子会向着的电极移动，这个过程就是电泳。

●在凝胶中DNA分子的迁移速率与、和等有关。

●凝胶中的DNA分子通过，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

4．实验步骤

1.DNA的粗提取与鉴定具体过程

①称取30g洋葱，切碎，加入10mL研磨液，充分研磨。

↓

②漏斗中垫，将研磨液过滤到烧杯中，℃处理，取上清液。

↓

③在上清液中加入体积相等的、预冷的溶液，静置2～3min，用玻璃棒沿同一方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去水分。

↓

④取两支20ml的试管编号A、B，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物溶于B试管的NaCl溶液中。然后向两支试管中各加入4mL的