葡萄糖注射液的细菌内毒素检查（药品生物检定）.pptx

5%葡萄糖注射液的

细菌内毒素检查;提纲;第一节概述;二、消除热原的方法

1.高温法180℃干烤3～4h或250℃干烤1h以上

2.吸附法常见的吸附剂如活性炭、石棉、白陶土等吸附

3.滤过法超滤法（3.0～15nm）超滤膜

4.蒸馏法多次蒸馏，并加有隔沫装置

5.酸碱法强酸、强碱、强氧化剂破坏

6.其它方法离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等;三、热原和细菌内毒素的关系;四、热原检查与细菌内毒素检查的关系

热原检查法比较成熟，但易受试验动物个体差异，方法灵敏度、药物本身性质（如乳糖酸红霉素引起降温，两性霉素B可引起升温）等影响，使用受到一定限制；细菌内毒素检查灵敏度高、准确、快速和廉价，但仍有部分药物因为干扰等其他因素无法使用。

两种方法目前都是可行的内毒素物质检查方法，在实际应用过程中可以结合药物本身性质进行选择。;第二节热原检查法（家兔升温法）;本节内容;试验动物;挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30min测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内，且最高最低体温的差数不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。

用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48h方可供第2次检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息两周以上。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。;试验环境;操作方法;结果判断;注意事项;实验室环境不安静，动物受惊扰、骚动，可影响实验结果。

注射液使用时要预热至38℃，并注意注射速度，不宜过快。

肛温计在使用前要进行校正。每年定期标定一次。

家兔多次使用，会因多次少量接触热原而引致对热原产生耐受性，复试时，挑选对热原敏感使用过2～3次的家兔进行试验为宜。;热原检查法中，对试验动物有怎样的要求，为什么要这样规定？;第三节细菌内毒素检查法;鲎试剂中含有凝固酶原和凝固蛋白原，在适宜的条件下（温度、pH、无干扰物质等），能被微量的细菌内毒素激活，而产生凝集反应。;需建立内毒素检查项目的品种;本节内容;一、基本概念;（2）细菌内毒素的限值（L）???为保证用药安全，给每一种药物规定了相应的限值，只要低于该限值，按照规定给药途径即为安全。常用于计算限值的公式为L=K/M。

（3）最大有效稀释倍数（MVD）：指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测，常用的计算公式为MVD=cL/λ。;（4）细菌内毒素国家标准品（RSE）：系自大肠埃希菌提取精制得到的内毒素。用于标定细菌内毒素工作标准品的效价和标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度。;（5）细菌内毒素工作标准品（CSE）：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价。细菌内毒素工作标准品用于鲎试剂灵敏度复核、干扰试验和设置的各种阳性对照。;（6）细菌内毒素检查用水（BET）：指内毒素含量小于0.015EU/ml（凝胶法）或0.005EU/ml（光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。;二、试验流程;1、试验器具的要求;细菌内毒素限值（L）：

L：供试品细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U表示。

K：人每kg体重每h最大可接受的内毒素剂量。注射剂K=5EU/（kg·h），放射性药品注射剂K=2.5EU/（kg·h），鞘内用注射剂K=0.2EU/（kg·h）。

M：人用每kg体重每h的最大供试品剂量，依据药品说明书或《临床用药须知》确定。注意M一定要找到最大量，如果有儿童用量，按体重计一般高于成人量。;例：某注射剂产品人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量为14.3mg/kg，其浓度为100mg/ml，则L为多少（用EU/ml表示）？

;最大有效稀释倍数：MVD=cL/λ

L：供试品的细菌内毒素限值；

λ：在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml）；

c：供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则c等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，c的单位为mg/ml或U/ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD取1，即：c=λ/L，此时c又可以称为供试品的最小有效稀释浓度（MVC）。;例1：某葡萄糖注射液，其内毒素限值为0.5EU/ml，所用鲎试剂的灵敏度为0.125EU/ml。则MVD为多少？;例2：已知鲎试剂的灵敏度λ为0.25EU/ml，枸橼酸的内毒素限值L为0.5EU/mg，计算其最小有效稀释浓度（MVC）